pcr 在T载体上引物和酶的条件

同楼上,当初我问老师这个问题时,他说大学才学这么深

一般PCR使用两条引物,前后各一条,与模版DNA结合上后,前后的引物形成复制起始位点,共同向中间扩增,直到连上,一次扩增完成.

什么跟什么说的太不清楚饿了只要你需要的那段序列是对的不就行了嘛跟引物序列有啥关系毕竟大部分的PCR引物设计都是在需要的序列两端隔一段距离而且如果你测序是拿PCR引物测的话那前面的几十个碱基都是测不准的

mRNA序列从NCBI上搜如果是常规PCR引物用pp5设计realtime引物搜别人文献里面报道的实在没有再自己设计

那要看你做什么用,如果下一步你要构建载体的话,就需要相应的酶切位点,以便下一步操作.如果不做就没必要了.再问：只是想送去测序...为什么可以直接连接呢？再答：那就没必要加酶切位点了，因为现在的聚合酶一

M13F(-47)：CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACM13R(-48)：AGCGGATAACAATTTCACACAGGA

DNA复制的引物是一小段RNA,由引发酶合成.由于DNA聚合酶不能从头合成,所以必须先由一段RNA引导,在复制完成后除去,再用DNA代替.当然,在另外一些DNA复制模型中,末端的茎环结构也可以引导DN

酶切位点多数时候是反向回文结构,因此你看到的正向序列与反向互补序列是相同的,所以在两个方向的引物上看,酶切位点序列完全一样.

实时定量PCR是靠检测CT值（就是达到检测阈的循环数）从而测定原组织内mRNA量的实验手段.通过和标准曲线比对,可以精确知道原组织中某基因转录产物mRNA的量,从而对表达强度等进行分析.

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段

BestreactionforEcoRIishighslatbuffer,whileHindIIIislowsaltbuffer.ManycompanieswilltellyouHindIIIwoul

pcr是体外扩增,没有载体,你以为是在细胞里面呀,PCR体系温度变性时94℃,40秒蛋白质早就变性了,PCR是引物直接开始和模板DNA结合,在taq酶作用下延伸.我这两天正在做这个实验呢.没错!

理论上讲PCR产物可以直接酶切连接反应.但是,以PCR产物酶切的时候没有办法证明双酶切是否成功、彻底（PCR产物会有ployA的存在必须切掉,但是PCR产物和酶切产物大小差别不大）.而以T载体为媒介,

是定向克隆粘末端连接?如果不是有连接反了的可能再有一种可能就是送去测序的菌液有问题我有次是同样的片段测序,菌液没出来,用测序引物PCR的产物测序就合适了,可能菌液污染了

是不是你的引物扩出了非特异的条带啊,可能是你引物设计问题,不排除你模板问题.如果只是回收过程中紫外造成的突变,不应该是整个基因都不对,如果其他序列比对没有问题,只是酶切位点的问题,你要考虑是不是突变了

个人推荐使用PrimerPremier5

一小段寡聚的DNA,一般有两个（一对）,分为上游引物和下游引物,分别指导DNA两条链的聚合.它们主要作用有两个,一个是和模板特异性结合来指导taq聚合酶合成所要的片段.一个是提供一个3‘端的－OH末端

引物长度和专一性常见的引物长度为18-30个碱基.短的引物（≤15碱基）能非常高效地结合,但是它们的专一性不够.较长的引物能提高专一性,然而退火效率低,从而导致PCR产量低下.同时应避免编码单一序列和

那是显然的,所以在提rna做pcr的时候,如果里面混了基因组dna,那就有可能导致假阳性再问：谢谢，但是这不是我想要的答案。请问做半定量RT-PCR的引物怎么设计？可以设计在基因的非翻译区，然后扩非翻

真想由衷的说一句懒死你,网上到处是,就不自己查.Forward(17mer):5′-(GTTTTCCCAGTCACGAC)-3′（2956-2972）Reverse(17mer):5′-(CAGGAA