有没有人反向PCR以后,连到载体上,测序发现：只有引物正确,其它的都不是目的序列

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/04/30 03:15:53

有没有人反向PCR以后,连到载体上,测序发现：只有引物正确,其它的都不是目的序列
就是说反向PCR后,扩增出来的序列本应该是有酶切位点的,结果测序结果显示没有那个酶切位点,但是却有引物序列.

是不是你的引物扩出了非特异的条带啊,可能是你引物设计问题,不排除你模板问题.如果只是回收过程中紫外造成的突变,不应该是整个基因都不对,如果其他序列比对没有问题,只是酶切位点的问题,你要考虑是不是突变了.
再问：其他序列也有问题，也找不到酶切位点，只能找到引物！也就是说和我已知的部分序列没有相似，本来应该有的没切位点却没有了！！谢谢，呵呵这是怎么回事啊？？这个实验是这样的，我们先把一个已知部分序列的片段用Hind3酶切，然后让让其自连成环，然后依据已知片段设计引物进行反向PCR，与载体连接后，上海生工测序（测通），结果找不到Hind3酶切位点。
再答：你好，我有问题不懂。第一，你既然知道其他序列有问题，那么你必然知道其他序列，那么为什么还要用反向pcr的方法，直接设计引物pcr不就对了。第二，如果你不知道序列，那么你怎么知道本身是否包括hind3的位点。第三，你原来的hind3位点不该在两个引物之外吗？

有没有人反向PCR以后,连到载体上,测序发现：只有引物正确,其它的都不是目的序列从NCBI上查找到的一个目的基因做PCR,设计引物时PCR产物长度是这个基因的全部序列吗? 正向引物与反向引物在PCR中是什么作用?是不是一定都要?比如有这样一段序列,要扩增基因1,用什么正向和反向引物序列? PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我测序以后拿回来的DNA序列,怎么判断它的里面有没有引物序列?如果有的话怎么切除引物序列? PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带进行PCR扩增时为什么要将目的基因连到载体上?直接对其进行扩增不行吗? 为什么菌液PCR 引物一个载体上的一个是PCR片段上的鉴定正确后测序却完全不同?信号中断? 有别人构建好的含有目的基因的表达载体质粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因? PCR扩增正向引物,反向引物是什么?怎么结合的? 反向PCR引物设计的原理?怎样设计反向pcr的引物?急 his-tag 我的目的基因连在PET28载体上,设计引物时我把基因的终止密码子去掉,这样俩边的HIS-TAG都表达了,