作业帮我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊?
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/30 22:24:43
我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊?
阴性对照的作用就是来判断实验是否有污染的,如果PCR条带和阴性对照都弥散的话,原因应该是污染.污染一般有试剂的污染,也有可能是环境的污染.
先说试剂的污染.你设置的阴性对照所用的每一种试剂都存在被污染的可能,最实际也最麻烦的方法就是,每次更换一种试剂,重复实验,从而确定那种试剂发生污染.你提到的不加引物不弥散,那是必然的结果,及时所有试剂都发生了污染,不加入引物,扩增也是没办法进行的,结果也不会有条带.
再说环境的污染.环境的污染一般就是指气溶胶的污染,PCR实验室多少都会存在这种问题,气溶胶是比较难以消除的.先假设你所用的试剂都是正常的,你可以选择两到三对PCR产物片段较长的引物做试验（比你此次出问题的实验所选的要长）,进行正常PCR,电泳看结果是如何,如果不出现弥散现象,可初步判断为气溶胶污染.接着选两到三对产物片段较短的做实验（同上）,观察结果,如果同样出现弥散现象,此时可断定确实是气溶胶污染.
以上所说,属于理想状态,首先要排除个人操作失误,另外具体的情况再具体分析!
个人理解,
再问： 我用同样的试剂换一对引物PCR，有清晰的条带，证明试剂没有问题。考虑你说的气溶胶污染，我换个地方再加样一次试试。有了结果再向你请教啊。非常感谢了。
先说试剂的污染.你设置的阴性对照所用的每一种试剂都存在被污染的可能,最实际也最麻烦的方法就是,每次更换一种试剂,重复实验,从而确定那种试剂发生污染.你提到的不加引物不弥散,那是必然的结果,及时所有试剂都发生了污染,不加入引物,扩增也是没办法进行的,结果也不会有条带.
再说环境的污染.环境的污染一般就是指气溶胶的污染,PCR实验室多少都会存在这种问题,气溶胶是比较难以消除的.先假设你所用的试剂都是正常的,你可以选择两到三对PCR产物片段较长的引物做试验（比你此次出问题的实验所选的要长）,进行正常PCR,电泳看结果是如何,如果不出现弥散现象,可初步判断为气溶胶污染.接着选两到三对产物片段较短的做实验（同上）,观察结果,如果同样出现弥散现象,此时可断定确实是气溶胶污染.
以上所说,属于理想状态,首先要排除个人操作失误,另外具体的情况再具体分析!
个人理解,
再问： 我用同样的试剂换一对引物PCR，有清晰的条带，证明试剂没有问题。考虑你说的气溶胶污染，我换个地方再加样一次试试。有了结果再向你请教啊。非常感谢了。
我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊?
PCR结果没有条带,都是弥散的,这是为什么
PCR跑出来的条带比较弥散,主要有哪些原因啊?
Western blot实验电泳时 Marker条带不清晰,很弥散,无法辨别有几条带,请问什么原因可以导致啊?
请问若因为非特异扩增导致PCR产物弥散,理论上弥散带里是否应该包含目的条带?谢谢TT-TT
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后出现很多弥散的条带是PCR的原因还是电泳的原因呢?
二次PCR的产物电泳图观察,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,
PCR结果呈弥散状是什么原因造成的
跑出的细菌总DNA 的条带是弥散的,marker跑的也不清楚,
PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带
PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,
pcr电泳结果特别不清晰,条带很模糊 连MARKER也看不清上样孔很亮,不加任何东西的上样孔都很亮