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PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,

来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/04/27 23:28:01
PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都换了一遍了还是找不到原因,结果照旧,重新合成了引物还是不行.同样的材料另外一对引物就能做出来.我都做了两个月了,大家帮帮忙吧~
“从头拖到尾,另外一对引物就能做出来”
说明不是引物之间形成二聚体,而是第一对引物的设计有问题(特异性很差).如果一定要扩增那个区,建议引物的位置向两边放一放.如果你没有好的设计软件,建议到Primer3去试试(目前最好的免费引物设计).
如果还是不行,把序列发给我,我帮你设计(我有专业软件,ABI primer express 3 和 Invitrogen Vector NTI 10)