最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/04/27 22:29:32

最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒
然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍,PCR后拖带情况好转,现在的问题就是我上样9微升跑胶,目的条带很浅,这是为什么啊?

“单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒”,首先你的表达有误,单酶切可以切开,说明目的基因有连接上,那么重组载体该是比空载大的.
质粒稀释100倍后PCR,有目的条带,也说明了是阳性克隆.有拖带,你可以把退火温度提高试试.后面上样9ul目的条带很浅,应该是你稀释倍数太高了.我一般是不稀释的,直接PCR,不过得看你提取质粒时加多少体积的水溶.
我觉得不需要另外转入空载,PMD18-T vector的连接率挺高的.只要挑取阳性克隆抽质粒,经酶切、PCR后有目的条带就可以拿去测序了.如果PMD18-T vector只作为中间载体,可亚克隆到其他载体
再问：上午已经做了梯度PCR，寻找一下最合适的退火温度，正在跑胶，等会告诉你结果哈~谢谢！

最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒切开的质粒能转化进入感受态细菌吗将目的基因与质粒结合的过程中,是不是必须将目的基因的两端与切开的质粒两端都完全连接才可以呢? 空载体与空质粒的区别质粒和目的基因片段分别双酶切（bamh1,xba1）连接后电转感受态细胞,同时将质粒酶切回收的片段转化做对照转化了的质粒的细菌为什么要恢复培养怎样鉴定大肠杆菌质粒转化后获得的菌落是否为阳性? 质粒DNA的转化实验中在含Amp的选择性培养基上出现菌落,但阴性对照也有菌落出现,这说明什么?原因是什么农杆菌转化法中,转入受体细胞的是Ti质粒,还是质粒上的T-DNA? 质粒DNA的转化实验中在含Amp的选择性培养基上实验组和阴性对照都没有菌落出现,这说明什么?原因是什么为什么胶体中的分散质粒子的大小一定大于溶液分散质粒子的大小? 限制行内切酶切割质粒和目的基因后,目的基因是怎么和质粒连接的?