流式细胞仪-调节荧光补偿是不是把其他颜色荧光都调到零是最好的?

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：综合作业时间：2024/04/28 01:11:16

流式细胞仪-调节荧光补偿是不是把其他颜色荧光都调到零是最好的?
我用Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡,结果细胞给药后,细胞团层45度角向上偏,是不是荧光补偿没有调好,但是我的荧光补偿选中GRE时,RED调到最低；选中RED时,GRE调到最低；其实我对荧光补偿的原理不是很清楚,不知道这样调是不是对的,可不可以用比较容易懂的语言解释一下荧光补偿的原理,然后针对我这个结果,我应该如何调节荧光补偿?（上图是给药组,下图是正常组）

荧光补偿是因为每个荧光的光谱都比较宽.用你的例子来说,就是PI的荧光,不仅被PI这个通道的探测器所感应到,而且也同时被FITC的探测器感应到,所以一个PI染色会出现在双染的区域.另外FITC的荧光,也会同时被两个探测器所检测到.这时候就要做compensation.
你做compensation的时候,必须有3个管子,一个是无染料的,一个只染了PI的,另外一个只染了FITC.第一个管子,原来调节FL-1和FL-2的电压,是所有细胞都位于左下象限.然后保持电压不变,上FITC的管子,调节compensation 的数值(FL-2 - FL-1%）,使FITC阳性的细胞都位于右下象限,但是在水平位置上和阴性细胞一致,而不是最低.然后再上PI的管子,调节compensation数值,使PI阳性的细胞都位于左上象限.在垂直位置上和阴性细胞一致,但不是最低.
简单的说,就是把单个阳性的染色放到属于原来自己的位置上.
只有这个设置好了,才能往下做实验.
从你的图上看,你四个象限的设置并没有用无染色的细胞来设置.PI的阳性阈值设的很高.参照是什么?FITC的参照阈值是什么?这些都必须用无染色的细胞来设置.
再问：非常感谢您详细的回答！我的参照都是双染的control组细胞，我是以control组细胞来调，没有设单阳孔；如果我把PI的阈值再调低，那control组的细胞团会更偏下，这个怎么解决？如果以双阴性来调节细胞团的位置的话，一般双染的细胞团会相对双阴性向右偏移。这个是什么原因？所以以双阴性来调节是不是不太恰当？
再答：你的基本概念全错了，没有双阴性的，就无法设置阳性的gate。你如何判断那些是染色后的阳性细胞呢。
你说的向右移动，就是你compensation设置有问题，还有gate设置的问题

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