关于PCR产物酶切要构建一个载体目的基因PCR回收后做双酶切应该做多大的体系50 or 100?各种成分为多少?望大家不

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/04/30 13:26:41

关于PCR产物酶切
要构建一个载体
目的基因PCR回收后做双酶切
应该做多大的体系
50 or 100?
各种成分为多少?
望大家不吝赐教!
谢谢!

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同步双酶切
同步双酶切是一种省时省力的常用方法.选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步.NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer,以保证100%的酶活性.NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书.能在最大程度上保证两种酶活性的缓冲液即可用于双酶切.由于内切酶在非最佳缓冲液条件下的切割速率会减缓,因此使用时可根据每种酶在非最优缓冲液中的具体活性相应调整酶量和反应时间.
2、分步酶切
如果找不到一种可以同时适合两种酶的缓冲液,就只能采用分步酶切.分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始,酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求,然后加入第二种酶完成双酶切反应.
反应体系的话酶供应上岁产品会给相应的建议.体积多大要看个人实验所需,如果下游实验需要DNA的量很大那建议使用100ul的,如果需要的没有那么多,使用25ul或50ul也就够了.

关于PCR产物酶切要构建一个载体目的基因PCR回收后做双酶切应该做多大的体系50 or 100?各种成分为多少?望大家不 PCR产物电泳做胶回收不也得到纯化的目的?PCR产物纯化试剂盒的好处是什么? 如何验证载体质粒的酶切位点已被切开?PCR产物（目的基因）被酶切开? 有别人构建好的含有目的基因的表达载体质粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因? 大家好,我现在做细胞实验开始需要构建目的基因的过表达,不知道应该选用慢病毒载体还是腺病毒载体,标书从NCBI上查找到的一个目的基因做PCR,设计引物时PCR产物长度是这个基因的全部序列吗? 如果是载体是环形基因,PCR扩充目的基因时,限制酶的切法基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和在做载体构建的时候,PCR时有目的条带,但是摇菌酶切没有东西,请问是怎么回事啊? PCR产物纯化回收试剂盒,博凌科为的怎么样? 我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带!