基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/04/30 20:15:00

基因克隆实验
克隆实验问题
1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.
2、再用pMD-19载体连接目的片段,之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时,取300微升倒在LB平板培养24小时左右,以菌落长到直径1-2毫米为止；再挑3-5个单克隆放大培养24小时左右.
3、裂解菌体后,4°C ,12 000 g ,离心20-30分钟,取上清液.
4、PCR检测所得裂解后上清液（引物为M13-47,RV-M）,得到了目的片段大小的产物（稍长些）.
5、送菌液上清液测序（使用通用引物M13-47）,但是测序结果却是如下其概况：在载体插入点之间的序列BLAST后,显示为杆菌等细菌的片段,共送了16个样品均是如此（本实验应该是动物的序列）,看来不是空载,难道是载体连接上了细菌的一段序列,为什么会插入细菌片段呢,而且长度就这么巧!还是其他什么原因呢,恳请赐教!

目的基因是动物的相关基因片段PCR扩增的吗?你采用mRNA还是DNA啊?是扩增16SrDNA?不然怎么会显示杆菌的片段?BLAST比对如此奇怪?应该不会插入错误16组,估计实验操作的问题,或者使用NCBI比对生物信息时有误.说的够概况的,不太清楚,也很好奇,能不能步骤表述详细点?
一个好办法,克隆的菌落可以甘油保藏后直接送去测序,但是要告诉测序公司是甘油管样品.这样就可以看看是不是你前面的步骤有误或污染了.

基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的目的基因未连接到克隆载体上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18! 我想做胰岛素导入大肠杆菌的基因克隆实验.在ncbi中查找到了cdna,准备跑pcr,这个时候需要提取出cdna模采用质粒载体克隆目的基因,请问如何准确筛选出带有目的基因的阳性克隆?实验方案和基本流程? 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急克隆载体在生物体内的表达蛋白的量小,为什么有的实验,还将含有目的基因的克隆载体,直接打入生物体内关于PCR克隆基因的引物问题如何确保pcr产物以正确的方向克隆到表达载体中 (未翻译方向) 双酶切老是切不完全我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶从克隆载体上PCR出目的基因原理设计克隆一个基因的CDNA序列的实验!注意是实验哦!周四之前!谢谢,满意再+50! 关于克隆的问题.假如我有有一个基因片段,未知序列.我可以把它连接到T载体,然后PCR