作业帮我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：综合作业 时间：2024/05/07 06:00:38
我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个
用什么方法.
用什么方法.
双酶切,然后做ligase连接就好.连接的过程中会出现很多突变.
然后你把连接的产物做转化.如果有条件可以使用电激转化,这个转化的效率非常点（连接产物本来就不多,突变又多）.如果条件不够就用热激转化,热激转化的效率低一些,不如电激转化好.千万不要用TSS转化（效率太低了,只能用成型的质粒）.
转化之后你要挑选菌落,去做测序（一般交给公司）,因为突变很多,一定要测序到完全正确的序列.如果没有测到,就继续挑选菌落.如果菌落挑完了,就重新转化.这段时间要多扶老太太过马路哦.
等到你得到了好的菌落,就可以培养它,提取质粒.这个量就很大了.
给你个简单的protocol
PCR 你的基因
对PCR产物,和空质粒,同时使用双酶切（分开的）,加入合适的NEBuffer
使用T4ligase 和Buffer 常温1小时或者16度过夜 连接.
热激转化（电激转化还有clean脱盐）
挑去菌落
提取DNA 测序（（（得到了你要的哦）））
选定菌落,液氮保存
然后你把连接的产物做转化.如果有条件可以使用电激转化,这个转化的效率非常点（连接产物本来就不多,突变又多）.如果条件不够就用热激转化,热激转化的效率低一些,不如电激转化好.千万不要用TSS转化（效率太低了,只能用成型的质粒）.
转化之后你要挑选菌落,去做测序（一般交给公司）,因为突变很多,一定要测序到完全正确的序列.如果没有测到,就继续挑选菌落.如果菌落挑完了,就重新转化.这段时间要多扶老太太过马路哦.
等到你得到了好的菌落,就可以培养它,提取质粒.这个量就很大了.
给你个简单的protocol
PCR 你的基因
对PCR产物,和空质粒,同时使用双酶切（分开的）,加入合适的NEBuffer
使用T4ligase 和Buffer 常温1小时或者16度过夜 连接.
热激转化（电激转化还有clean脱盐）
挑去菌落
提取DNA 测序（（（得到了你要的哦）））
选定菌落,液氮保存
我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个
我想将 一个目的基因 植入质粒里面 能不能用将目的基因克隆进质粒里面这样讲呢
如何使目的基因连接到质粒载体上,目的基因怎么获得呢?
假如一个质粒上有一段抗生素基因,目的基因插入到这段抗生素基因的话,就难以筛选,可是,如果目的基因插入到抗生素基因意外的话
质粒与目的基因连接得到几种重组质粒
关于载体构建的问题我要构建一个GFP表达载体标记人体骨髓间充质干细胞的黏着斑,我想问一下这个载体的目的基因怎么获得?质粒
把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶?引物如何设计?
如何将目的基因和质粒结合成重组质粒
如果我把目的基因连接到质粒载体上,这个载体质粒又有多个启动子,我怎么知道它用那个启动的呢
目的基因能否在质粒上
限制行内切酶切割质粒和目的基因后,目的基因是怎么和质粒连接的?
如果一个质粒上有两个抗生素基因,其中之一被酶切,启动子和终止子之间加入一个目的基因