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用自己设计的引物pcr目的基因的保守区,总是不成功,大概都有什么原因~

来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/04/28 20:12:47
用自己设计的引物pcr目的基因的保守区,总是不成功,大概都有什么原因~
请问你试过几对引物?用过多少种酶跟退火温度还有延伸温度 ,pcr扩增的体系是要你慢慢摸索的 试试用Extaq高保真的酶扩增 如果在基因组上扩增建议你退火温度从55°开始扩,逐渐降低温度
再问: 引物大概有4对了,用的easytap酶和pfu酶,延伸72℃,退火温度也设计过梯度pcr,我的退火温度是根据设计的引物大概降低了5度开始的~~~
再答: 你在扩多长的片段怎么用Pfu酶?是在基因组上扩增的吗?