请问Pfu DNA Polymerase用于PCR能保证扩增多大的片段无错配?

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/05/01 08:31:47

pfu dna polymerase是目前已知dna合成准确性最高的酶.在正常的pcr扩增程序下,其扩增产物的错误率为4000bp中发生一个.错误率仅为taq dna polymerase的1∕7--1∕10.pfu dna polymerase的耐高温性亦优于taq dna polymerase,变性温度可高至98℃（此时必须加矿物油以免反应组分蒸发）以扩增gc含量较高的模板.
通常pfu dna polymerase的扩增程序为：
变性温度 94℃－98℃, 5－10分钟
变性温度 94℃－98℃, 15秒－2分钟
复性温度 40℃－68℃, 30秒－2分钟
延伸温度 68℃－75℃, 扩增速率1分钟1kb,根据目的片断长度另加15秒至1 分30秒, pfu dna polymerase的最适温度在74℃左右.
扩增25到35个循环.
注意事项:
1. pfu dna polymerase由于具有校正功能,dna合成速率慢于 taq dna polymerase,同时所需的dntp量一般要高于 taq dna polymerase,一些小公司的dntp浓度往往低于其标定值有时甚至要低一倍左右,导致pfu dna polymerase的扩增失败.
2. pfu dna polymerase产生的片断为平末端,不能直接用于t－载体克隆,可用taq dna polymerase加a末端后再用于t－载体克隆或直接在引物的5’端设计合适的酶切位点,酶切后再克隆到相应酶切载体.
3. 保存在－20℃. 本产品pfu dna polymerase 的storage buffer组分为：50mm tris－hcl（ph8.2 at 25℃）,0.1mm edta, 1mm dtt,50%甘油,0.05% chaps；
10x reaction buffer with mgso4的组分为： 200mm tris－hcl（ph8.8 at 25℃）,100mm kcl,100mm (nh4)2so4, 20mm mgso4, 1.0% triton x-100, 1mg/ml bsa.

请问Pfu DNA Polymerase用于PCR能保证扩增多大的片段无错配? 请问!博凌科为的 Pfu DNA Polymerase（含预混Mg2＋的10×Pfu Buffer）怎么样啊?有没有谁 PCR为什么能扩增特意的基因片段呢 16S RDNA作为通用引物,用于细菌总DNA 提取后跑PCR,扩增出的片段是多少个bp呢? 设计pcr体系质粒扩增扩增片段1.8kb两引物都是87碱基pfu酶怎样设计预变性变性退火延伸的时间和温度我的引物g pcr扩增目的片段时,在第几个循环后才能出现目的片段长度的双链DNA分子? 请问做RT-PCR时,怎么根据扩增的片段长度确定dNTP的用量? pcr扩增出来的东西与模版dna完全一致吗?还是说只扩增出模版中的某一段序列（我们需要的基因片段）? PCR仪一般每分钟扩增多长的片段 PCR 中用到的Taq DNA Polymerase 试剂盒如何使用呢? 小片段DNA（100-200bp）的PCR扩增 PCR扩增DNA的操作里为什么要用引物?