想扩基因cDNA全长,怎么设计引物,是不是取参照基因的两端作为引物就好了

你的realtimePCR扩增的是cDNA啊,因此用CDS序列啊.

cDNA不是被克隆出来的,而是mRNA反转录出来的.你现在要做的是克隆编码区全场,而不是cDNA.如果你有反转好的cDNA,序列也已知的话,直接在3'和5'非翻译区设计引物,以cDNA为模板,克隆出全

DNA测序主要有两种方法：化学法和酶法主要步骤有：一端标记,碱基特异剪切.特定减机修室,然后进行凝胶电泳可以查一下：早期的化学法：MaxamGilbert化学法如今多用用四种DDNTP进行末端终止的s

通过LongPCR等技术首次克隆得到全长9388bp的牛催乳素(bPRL)基因组序列(GenBank登录号AF426315),其中包括bPRL基因全部5个外显子和4个内含子,5′端854bp的上游调控

为具有与某RNA链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementaryDNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链.与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,

1,到genebank里面找到几个近缘种的该基因序列,用序列软件（例如DNAMAN）比对一下,在相对保守的区域设计成对引物.2,查阅一些文献,看要克隆的该基因在哪种组织里面表达量高.然后提取该组织或部

有些是有些不是,上面有注明的,你仔细看就知道了.有的写出了内含子和外显子.

1.首先这应该是个融合表达载体.应该考虑后面的读码框问题.就是应该适当在后面的酶切位点前加入0-2个碱基.使得你的目的基因和egfp在同一读码框内.2.KOZAK序列在真核细胞中表达有作用,这就看你后

您应该使用巢式PCR来做这个实验.无论您是先提RNA再做反转录,还是直接从DNA中获得基因,考虑到模板的复杂性,都应当使用巢式PCR.建议您先从目的基因的上下游设计一段引物,即外引物,再根据目的基因上

1先根据部分序列设计一对引物验证一下序列是否正确（很确信就免）,需要的话克隆,有文库的话杂一下文库；2根据已知序列设计三条巢式引物,进行5’RACE,拿到5’序列；3同时设计巢氏引物,进行3’RACE

通过NCBIblast得到全长,设计引物,PCR获得基因全长.再问：NCBIblast是什么？麻烦说的详细些再答：NCBI是个网站，美国国家生物信息中心http://www.ncbi.nlm.nih.

cDNA文库不同于基因组文库,被克隆DNA是从mRNA反转录来源的DNA.cDNA组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列.cDNA文库以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当

基因文库是包含某一生物所有基因的文库,而基因组文库只包含某一种生物的部分基因,CDNA就是基因组文库的英文简称,我刚刚高考完,可以相信我

cDNA由mRNA逆转录出一条链,再按照互补原则扩增出另一条链,从而形成双链DNA.与基因组相比,cDNA不包括非编码区的序列,也不包括内含子的序列,因此全长cDNA序列要比基因组序列少.

都不知道你已学了什么生物信息学知识,怎么回答?如别人前面回答的,可以定位位置,可以了解诶内含子,了解cDNA对应gDNA有多长,可以从cDNA翻译得到蛋白质,可以分析推算出来的蛋白质序列的一些性质,比

体系没啥调整的降低退火温度不行的话就换对引物再问：降低了啊，P出很多带，但是没有大小和目的条带相符的，我用的是KOD高保真酶，和选用的酶关系大吗？再答：一般关系不大如果实验室还有别的可以试一下应该是引

建议你先上网学习一下引物设计最简单的一些知识我设计引物是用Omiga软件的,使用比较简单,只要新建一个核酸文件,把目的基因序列粘贴进去,扩增全长的话一般都是手工选取18～22bp长度,再加入内切酶碱基

cDNA文库是用mRNA逆转录得到的DNA,只含有编辑对应蛋白质的信息,没有控制该基因表达的相关元件（启动子、终止子、增强子）,也没有内含子.因此,cDNA文库的基因没有启动子和终止子.

只含有引物往前的一段序列一条mRNA上只有一个基因所以不存在什么下游所有基因而且反转录是从mRNA的3‘到5’走的.再问：原核生物的mRNA怎么会只有一个基因呢？原核生物的基因不是以操纵子形式存在的吗

1）若是直接知道该蛋白质中氨基酸的序列,可以用来推测氨基酸中的碱基序列,并用化学合成仪直接合成该cDNA2)用该基因转录出的mRNA进行逆转录3）用鸟枪法直接从原核生物体内分离