博凌科为的通用T载体菌落PCR鉴定试剂盒说明书

.同步双酶切同步双酶切是一种省时省力的常用方法.选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步.NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer,以保证100%的酶活性.NEBuffer的组成及

吨

菌落PCR建议,对菌落进行预变性处理,将挑取的单克隆溶于10ul无菌水（1半保存）,分5ul出来进行95度10min变性然后直接放冰上进行预变性处理,相当于提高模板量,提高产量.　　有杂带,建议提高T

T载体分两种.一种是末端带有A的典型的T载体,这样的T载体可以与taq酶扩增出来的片段连接,另一种是平末端的T载体,这种T载体末端没有A,它用于以pfu或者是phusion这样的高/超保真酶扩增出来的

PCR扩增目的基因时,用限制酶的切取目的基因就可.与载体没有关系.载体是在构建表达载体时才用.限制酶切获取目的基因,一般都用同种限制酶,从外源基因上切两刀即可获取目的基因,多位黏性末端.PCR扩充目的

博凌科为生物科技-为你直接挑曲单克隆,一般使用特异引物,在体系中进行PCR即可,细胞热解后DNA释放就能进行PCR扩增~

假阳性1.平板是否加抗性?2.引物设计是否有问题?3.载体自连现象是不是很严重?建议做个对照4.菌落pcr条件是否合适?

原来扩增的时候就有两条带,回收的时候（是凝胶回收吗?）可能因为产物浓度过大,导致两条带没跑开,让你一起切下来了（回收后电泳检测了没?）,所以连接后有两种克隆.至于说为什么会出现两种克隆,要具体问题具体

这很正常,一般做蓝白斑挑斑会更精确,不过现在的连接酶成功率很高,不少已经达到90%以上,但仍然存在只转化了质粒而未连接成功目的条带的菌落.所以挑斑时一般要多挑几个,而且选单菌落,可以画圈圈分散开来挑斑

M13F(-47)：CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACM13R(-48)：AGCGGATAACAATTTCACACAGGA

长片段PCR扩增试剂盒所用的酶是Taq聚合酶和有校正功能的聚合酶的混合酶,这种混合酶可以染色体和其它细胞器的DNA为模板高效进行PCR反应.在人的染色体上可以扩增出27kb的DNA片段,而以DNA为模

博凌科为的这款产品是同类产品中比较不错的.它是在高离序盐存在的情况下,DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去

BestreactionforEcoRIishighslatbuffer,whileHindIIIislowsaltbuffer.ManycompanieswilltellyouHindIIIwoul

没连进去呗可能是最初的PCR就没扩增出来你要的条带调整下退火温度或者直接连T载体测序或者换对引物再问：直接连T载体测序，这个怎么弄？引物是别人设计好的，所以很纠结。我们拿菌液提质粒有，只是不很多。再答

理论上讲PCR产物可以直接酶切连接反应.但是,以PCR产物酶切的时候没有办法证明双酶切是否成功、彻底（PCR产物会有ployA的存在必须切掉,但是PCR产物和酶切产物大小差别不大）.而以T载体为媒介,

利用菌落作为模板进行PCR扩增,验证该菌落里是否带有目标片段.但是由于PCR是一个级联放大的过程,所以即使菌落中不含有目标片段,而是菌落表面沾有一部分之前连接,转化中用的目标DNA,也会导致PCR获得

可以的.我们验证转化结果时就是根据这个原理的,只不过一般是扩增质粒内的基因,但如果有正确的引物,同样可以扩增基因组上的基因的关于单菌落的处理,一般是把菌落挑到无菌水里,然后沸水煮5min就可以了,目的

如果你确认“转化后挑取含有目的片段的单菌落”这个步骤正确的话,就是你的PCR出问题了么,继续扩增便可.目的片段与载体脱离还是保留的菌种失活?应该都不会.我认为你的PCR体系除了问题,换一组酶和buff

要是实际应用的话,你做个链接试试就知道了呗或者电泳的时候点一个没切过的做下对照,迁移率会有差别

完全确保的话,第一,做酶切的两个酶要不一样；二你在做完酶切后,用磷酸化酶处理下,纯化后再连接（这一不会降低连接效率,但会确保质粒不自连.按正确方向克隆