用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/04/30 17:25:21

用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗
怎么筛选这种呢?

我理解楼主的问题是这个样子.在连接之后的筛选其实是分两步的.第一步是筛选出含有载体标记基因的连接产物,这样的产物可能有载体-目的基因连接和载体-载体连接,利用的一般是载体上的标记基因的抗性培养（一般的标记基因是抗四环素或者是抗氨苄青霉素基因,只要用四环素或者是氨苄青霉素的培养基就可以了）.第二步是筛选出载体-目的基因,在上一步的培养基上挑菌,扩大培养之后,再接种的目的基因的培养基上,从而筛选出阳性克隆就可以了（这一步常用的、比较简单的方法就是蓝白板的筛选）.所以即使有载体-载体的连接物,也是会被在第二步筛选掉得.
载体自连的概率其实不小,因为这是一个宏观统计的问题,况且一般的载体都要比目的基因大很多,楼主应该一想就会明白.所以在实验中一般采用的是用两种不同的内切酶处理切口,这样就限定了连接的顺序和方向,减少了无用的连接产物.
楼主如果还有疑问还可追问,小的尽量帮忙解答.O(∩_∩)O~
楼主加油!
再问：很详细哈~那个阳性克隆能简单解释下么？
再答：恩~所谓阳性克隆就是可以表达的目的基因，这种筛选的方法就比较多了。我说的蓝白板只是其中的一种，这其中涉及到乳糖操纵子的内容，比较深，需要画图解释，我尽量让楼主明白吧。乳糖操纵子是E.coli利用乳糖（galactose）的一种方式，主要有其中lacZ基因编码β-半乳糖苷酶的基因。在载体上设计上了lacZ的基因（如pBS载体，但是现在很少使用了），然后可以把目的基因插在lacZ的基因的C末端之后，然后只要lacZ表达了，目的基因也就表达了，因为二者共用一套的启动子结构。目的基因表达的就是阳性克隆。然后利用lacZ编码的β-半乳糖苷酶可以参与分解半乳糖，在IPTG的诱导下形成蓝色的菌落。挑这些蓝色的菌扩大培养就可以的，这些就是阳性克隆~ O(∩_∩)O~不知道我说的够不够清楚~ 楼主加油！

用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗用同种限制酶切质粒和含有目的基因的DNA,用DNA连接酶连接后为什么不会出现载体-目的基因连接物这种产物? 为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接,酶切的图示目的基因片段与载体DNA连接的主要有? 我不理解为什么用同一种限制酶切割目的基因于载体?限制酶不是有专一性吗?用同一种不是说明载体上也有想要的基因?（那把载体直为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急限制酶切青霉素抗性基因并导入目的基因后是在含四环素的培养基上生长还是在含青霉素的培养基上生长? 限制行内切酶切割质粒和目的基因后,目的基因是怎么和质粒连接的? 关于基因表达载体基因表达载体,不是用限制酶切开质粒,然后插入目的基因吗?那么,为什么又要有启动子来启动转录出mRNA?要是不是插入目的基因的载体全都有标记基因? 其实是概念性的问题目的基因不是经过限制酶切割后才有的吗?目的基因与质粒重组中有个步骤是：用同种限制酶切割目的基因...这标记基因和目的基因是连在一起的吗?如何用标记基因筛选目的基因载体?