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PCR产物测序问题用PCR产物直接测序,PCR产物是1200bp左右,但是测出来只有1000bp,请问为什么少了这么多序

来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/04/29 16:27:07
PCR产物测序问题
用PCR产物直接测序,PCR产物是1200bp左右,但是测出来只有1000bp,请问为什么少了这么多序列呢,我是新手,刚开始做,很多不懂得,望请指教,
你让公司测通 不然最多只能测1000左右的序列 而且只有不到800的测序是靠谱的 后面的都不靠谱
再问: 测出1000bp,前面20bp左右序列不太一样,后面都是一样的,还有测通是什么意思,全部的序列都能测出吗?我测得是双向的
再答: 前面几十bp测的也不太准 测通的话就是公司会自己合成引物往后测 双向拼起来只有1000么 你是确定这产物1200还是跑胶看大概1200 如果后者的话那也是不准的 毕竟每个marker只是在特定的胶浓度下才准确 那我估计你这就是1000bp
再问: 是双向的只有1000,我的目的片段是已知的一段序列,1200左右,测序就是为了验证目的片段的序列是否正确,目的片段是转化后,挑单克隆进行菌液PCR得到PCR产物进行测序的
再答: 哦 那可能P出来就少了那200 挺正常 重新P一次吧 或者你就让他正向测通一次看看
再问: 双向的少了五六十个碱基