作业帮 > 生物 > 作业

如果测序报告说样品是双克隆,怎么办?

来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/01 20:15:03
如果测序报告说样品是双克隆,怎么办?
可能是两个菌落靠得比较近,培养的时间又比较长,所以长成“一个”菌落,我觉得是可以避免的:1、培养时间不要过长,挑菌尽量挑分得比较开的部分,不挑疑似,因为长在一起的菌落一般不可能是圆形的,而是略成椭圆型;2、挑菌过后不要直接测序,而是做一个菌液PCR,引物不要选择你连入片段的引物,而是用载体两端的通用测序引物(最好是你交付公司所使用的测序引物,如M13、T3、T7),这样如果是非单克隆,PCR产物就非单带,这样即可以降低非单克隆,又可以对连入片段大小做个二次验证,从而提高效率和降低测序的成本.
如果测序结果回来是非单克隆的话,我们一般是将该样品的保种菌液(我们一般是挑菌摇好以后,做完PCR验证,然后每个克隆保种3管,送测序公司一管,自己保存两管)涂个板,再PCR验证,测序.