作业帮western blot等生物学试验中的内参是什么意思?
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：综合作业 时间：2024/05/02 20:46:08
western blot等生物学试验中的内参是什么意思?
western blot用来检测蛋白表达的变化,而检测表达变化的前提就是,你每个孔跑得总蛋白量是相同的,如果上样量都不同,还怎么检测不同组间目的蛋白量的区别,这样内参就可以作为检测蛋白上样量是否相同的标准.内参一般选那些表达水平比较固定的一些蛋白,比如说actin,这些蛋白的表达水平不会因为你的实验条件而改变,也就是说它始终就是表达那么多,如果这些蛋白的表达量一样,那么我们就认为总的蛋白是相同的.
再问： 那是不是内参曝光一次，样品曝光一次呢？需要两张膜？哎呀呀，我没坐过western啊，东西都是文献看的，但是很多不懂，导致文献的图都看不懂，求大神指教啊！！
再答： 肯定是在一张膜上做的啊。一般分这两种情况： 一个是目的蛋白和内参蛋白的分子量相差较大，这个时候在转膜之后，可以从中间剪开，然后分别杂抗体之后，再同时曝光。 第二种情况是两者分子量相差很小，很难剪开，毕竟转膜之后还看不到蛋白。此时可以有两个方法：一是先杂一个蛋白抗体，再杂另一个蛋白的抗体，然后再一起曝光；另一种是先做完一个蛋白到曝光完成，然后用一种特殊的试剂，可以把之前的抗原抗体复合物拉下来，然后在杂另外一个蛋白。
再问： 那是不是内参曝光一次，样品曝光一次呢？需要两张膜？哎呀呀，我没坐过western啊，东西都是文献看的，但是很多不懂，导致文献的图都看不懂，求大神指教啊！！
再答： 肯定是在一张膜上做的啊。一般分这两种情况： 一个是目的蛋白和内参蛋白的分子量相差较大，这个时候在转膜之后，可以从中间剪开，然后分别杂抗体之后，再同时曝光。 第二种情况是两者分子量相差很小，很难剪开，毕竟转膜之后还看不到蛋白。此时可以有两个方法：一是先杂一个蛋白抗体，再杂另一个蛋白的抗体，然后再一起曝光；另一种是先做完一个蛋白到曝光完成，然后用一种特殊的试剂，可以把之前的抗原抗体复合物拉下来，然后在杂另外一个蛋白。