只有一台分光光度计,怎么对核酸进行定性鉴别和定量测定?
来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/04/28 06:41:11
只有一台分光光度计,怎么对核酸进行定性鉴别和定量测定?
只有一台分光光度计,那应该题目是说没有酸溶性核苷酸和低聚多核苷酸吧,这些都是要用钼酸铵-过氯酸沉淀剂,沉淀除去大分子核酸,因为用分光光度计是不允许有沉淀的.
将样品配制成 一定浓度的溶液(20~50μg/mL),选 取比色杯厚度为1CM,在紫外分光光度计上直接测定260NM和280NM的OD值.
若OD260/OD280在2.0以上,为RNA,若在1.9左右,为DNA.
计算含量:RNA浓度=OD260/(0.024*L)*稀释倍数 (微克/毫升)
DNA=OD260/(0.020*L)*稀释倍数
其中,OD260为260nm波长处光密度读数;L为比色杯的厚度;0.024为每毫升溶液内含1微克RNA的光密度;0.020为每毫升溶液内含1微克DNA钠盐时的光密度.
PS:选 260NM计算是因为核酸(DNA,RNA)的最大紫外吸收值在260nm 处.
将样品配制成 一定浓度的溶液(20~50μg/mL),选 取比色杯厚度为1CM,在紫外分光光度计上直接测定260NM和280NM的OD值.
若OD260/OD280在2.0以上,为RNA,若在1.9左右,为DNA.
计算含量:RNA浓度=OD260/(0.024*L)*稀释倍数 (微克/毫升)
DNA=OD260/(0.020*L)*稀释倍数
其中,OD260为260nm波长处光密度读数;L为比色杯的厚度;0.024为每毫升溶液内含1微克RNA的光密度;0.020为每毫升溶液内含1微克DNA钠盐时的光密度.
PS:选 260NM计算是因为核酸(DNA,RNA)的最大紫外吸收值在260nm 处.
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