我进行的是原核蛋白表达,表达载体是PET32a,表达菌液超声后在上清电泳条带很好,可是没有酶活

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/04/29 03:43:14

我进行的是原核蛋白表达,表达载体是PET32a,表达菌液超声后在上清电泳条带很好,可是没有酶活
是冰浴超声,并且功率为400,

首先得判断蛋白条带是否正确,因为32a表达过程中,会在目标蛋白上加上部分自己序列,所以电泳图谱中你所要表达的蛋白,应该比你自己预期的大20-30kDa.
其次,原核表达,只是表达了酶蛋白序列,但蛋白序列与酶之间不能划等号,要有一个正确的加工之后形成合适的二、三级结构,蛋白才有活性
再问：首先跑的条带确实比我的蛋白大了10kda,是因为形成融合蛋白的原因吗？那我纯化后然后再进行酶切（标签）蛋白会有作用吗？其次这个问题怎么改进才能有活性呢？

我进行的是原核蛋白表达,表达载体是PET32a,表达菌液超声后在上清电泳条带很好,可是没有酶活您好,我看您在表达载体这一块懂的比较多,我想请教您我构建PET32a表达载体,但是没有办法表达,求原因原核表达时跑完电泳,条带应该是多大,是和自己的目的基因蛋白的分子量一样,还是得加上标签蛋白的分子量? PET-41a载体表达出来的蛋白是可溶性的活性蛋白吗?一段基因进行原核表达,必须有活性,怎么选载体, 请问表达蛋白时对载体质粒有要求吗,我要做原核表达,现有很多质粒可作为载体,如PET32a和PGEX4t-1,如何选我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带! 英语翻译有何解决的策略?在原核表达系统中表达载体上最常用的表达调节开关是什么?简述其工作原理真核表达载体的特点,原核表达载体的特点求助：请问用Pet-32a做原核表达载体,翻译是从载体上的ATG开始还是我所扩基因上的ATG开始? 原核表达,为什么空载表达的很好,目的蛋白没有表达,可能的原因有什么? 基因工程为何要先构建克隆载体然后后构建表达载体能否在获得cDNA后直接连到表达载体上目的基因上游引物中引入了终止密码,而原核表达载体上有ATG,这样我的目的基因能被表达出来吗?