作业帮用氯化钙制备感受态细胞的做转化后一个菌落都张不出的原因 我是按照文献步骤做的呀
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/28 04:51:45
用氯化钙制备感受态细胞的做转化后一个菌落都张不出的原因 我是按照文献步骤做的呀
1、 取大肠杆菌原始菌株（无外源质粒）单菌落接种于5mlLB培养液中,37℃,摇荡过夜；
2、 取1ml过夜培养物接种于100mlLB培养液中,37℃振荡培养3—4小时,待细菌达到对数生长期（OD600为0.5-0.6）即可；
3、 将培养液转移到两只预冷的50ml无菌离心管中,置冰上10分钟,使菌液冷却到0℃ 3000rpm、4℃离10min；
4、 弃上清,每只离心管加入10ml冰冷的0.05%无菌CaC12将菌体重悬,冰浴放置30分钟,3000rpm、4℃离心10min；
5、 每只离心管加入2ml冰冷保存液0.05%的Cacl2+甘油重悬沉淀,将两管混合,按每样200ul分装于无菌1.5ml离心管中；
6、 迅速放置于-80℃保存备用.
1、 取大肠杆菌原始菌株（无外源质粒）单菌落接种于5mlLB培养液中,37℃,摇荡过夜；
2、 取1ml过夜培养物接种于100mlLB培养液中,37℃振荡培养3—4小时,待细菌达到对数生长期（OD600为0.5-0.6）即可；
3、 将培养液转移到两只预冷的50ml无菌离心管中,置冰上10分钟,使菌液冷却到0℃ 3000rpm、4℃离10min；
4、 弃上清,每只离心管加入10ml冰冷的0.05%无菌CaC12将菌体重悬,冰浴放置30分钟,3000rpm、4℃离心10min；
5、 每只离心管加入2ml冰冷保存液0.05%的Cacl2+甘油重悬沉淀,将两管混合,按每样200ul分装于无菌1.5ml离心管中；
6、 迅速放置于-80℃保存备用.
可能性很多.
1、感受态不好.“待细菌达到对数生长期（OD600为0.5-0.6）”,你测OD了吗?其实很麻烦,建议稍微有点混就好用了；感受态细菌在无抗生素培养基上能否生长?
2、菌株与质粒不兼容.
3、转化体系也很关键.DNA宁可少点,多了影响效率.
4、DNA是否正确,至少是环状的.有无做超螺旋质粒的阳性对照?如果你做的是质粒构建的话,转化效率很低,有个对照会很好判断意外.
5、转化过程的操作.热休克、和复苏是否正确?复苏时不能加抗生素?
6、培养基是否正确?
建议做阳性对照（质粒）和阴性对照（没转化的感受态不能生长）,有了对照结果就好判断了
1、感受态不好.“待细菌达到对数生长期（OD600为0.5-0.6）”,你测OD了吗?其实很麻烦,建议稍微有点混就好用了；感受态细菌在无抗生素培养基上能否生长?
2、菌株与质粒不兼容.
3、转化体系也很关键.DNA宁可少点,多了影响效率.
4、DNA是否正确,至少是环状的.有无做超螺旋质粒的阳性对照?如果你做的是质粒构建的话,转化效率很低,有个对照会很好判断意外.
5、转化过程的操作.热休克、和复苏是否正确?复苏时不能加抗生素?
6、培养基是否正确?
建议做阳性对照（质粒）和阴性对照（没转化的感受态不能生长）,有了对照结果就好判断了
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