作业帮转基因株系怎样通过设计半定量 RT-PCR的引物区分内源表达与外源表达?
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/13 05:26:51
转基因株系怎样通过设计半定量 RT-PCR的引物区分内源表达与外源表达?
因为你是设计半定量RT-PCR的引物,所以你并不需要全长的ORF,只要一部分序列就可以了.这样你在设计引物的时候,将内源基因和外源转入基因进行比对,选取二者特异性的区域设计两对引物.一对是内源基因的特异性引物,一对外源基因的特异性引物.这样你分别用不同的引物做RT-PCR就知道是内源或者外源基因表达了.而且你还可以进行表达量的半定量分析.
再问： 转基因株系中，内源基因的引物与外源基因的引物有什么差异？我不太明白，内源基因和外源基因应该产生同样的RNA ，怎么通过半定量RT-PCR去区分两者？
再答： 除非你的外源基因是在转基因株的这个种中获得的，不然都会有差别的。外源基因一般应该是从其他物种中获得的吧，所以即使你转基因生物里面有同源基因，它们的编码序列也不会完全相同的。所以转入的外源基因和本身的内源同源序列是有差别的。要通过半定量RT-PCR来区分二者，只要找到差异区域就OK了。比方说，内源序列中有AB两个区域和外源基因不同，那么以内源基因的A与B区设计引物1，然后以外源基因的A与B区设计引物2。接下来分别用引物1和引物2做RT-PCR，那么引物1就只能获得内源基因的mRNA表达片段，而引物2就只能获得外源基因的mRNA表达片段。根据电泳的条带亮度，就可以对内源基因和外源基因的表达量进行半定量。当然，这个对比建立的前提是你这里所指的内源基因是你转入的基因的同源基因。
再问： 转基因株系中，内源基因的引物与外源基因的引物有什么差异？我不太明白，内源基因和外源基因应该产生同样的RNA ，怎么通过半定量RT-PCR去区分两者？
再答： 除非你的外源基因是在转基因株的这个种中获得的，不然都会有差别的。外源基因一般应该是从其他物种中获得的吧，所以即使你转基因生物里面有同源基因，它们的编码序列也不会完全相同的。所以转入的外源基因和本身的内源同源序列是有差别的。要通过半定量RT-PCR来区分二者，只要找到差异区域就OK了。比方说，内源序列中有AB两个区域和外源基因不同，那么以内源基因的A与B区设计引物1，然后以外源基因的A与B区设计引物2。接下来分别用引物1和引物2做RT-PCR，那么引物1就只能获得内源基因的mRNA表达片段，而引物2就只能获得外源基因的mRNA表达片段。根据电泳的条带亮度，就可以对内源基因和外源基因的表达量进行半定量。当然，这个对比建立的前提是你这里所指的内源基因是你转入的基因的同源基因。