特异引物PCR问题各位大牛,小弟初涉分子生物实验,最近在用设计好的特异性引物扩增保守序列,可是总也是扩增不出来,常常是只

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/04/27 14:46:21

特异引物PCR问题
各位大牛,小弟初涉分子生物实验,最近在用设计好的特异性引物扩增保守序列,可是总也是扩增不出来,常常是只有引物二聚体,没有任何扩增条带,我也试着在引物报告单上所给的Tm值附近尝试退火温度,但依然是没有结果,望大牛们能给以指导,小弟不胜感激!
引物设计应该没有问题，是用Primer设计的，而且我找师兄看过了，引物应该没有问题，梯度我也做了，但不知道为什么梯度做了几次，每次都是什么都没有

首先你应该用PCR的内参照基因作为阳性对照验证你的PCR体系有无问题,然后看看primer上你的引物会不会形成发卡结构,引物间的二聚体,如果有可以尝试在做PCR之前用沸水将引物煮五分钟再在冰上冷却以减少引物二聚体的形成,另外除了看tm值外,你还应该看看引物的GC含量高不高,两引物间长度是否相差太大.除此,你还可以做一次touch down试试看,祝你好运!

特异引物PCR问题各位大牛,小弟初涉分子生物实验,最近在用设计好的特异性引物扩增保守序列,可是总也是扩增不出来,常常是只在进行PCR实验扩增时如何设计引物?为什么要用引物?原理是什么? 为什么PCR引物设计中引物可以不从扩增序列两头开始?不从两头开始能得到上下游引物以外的序列吗? 引物设计问题,以mRNA序列设计引物,然后用cDNA为模板来扩增,在设计引物时mRNA序列是否要反转序列? PCR引物设计中的问题、保守序列在目的基因内、但是引物为什么在保守序列设计? 如果要使用PCR扩增一段已知的DNA序列,要如何设计引物高分~~急求!如果要用PCR扩增下列序列,请写出上游引物和下游引物的序列 pcr扩增中,如何设计引物? 长pcr引物设计以及扩增条件请问在ncbi上blast的时候,需要去除pcr扩增引物序列吗? 使用PCR扩增以下DNA模版中的基因1,需要的一对引物序列是一段DNA序列为：acgttgatgcaggtg.cgtgcagaacaggct,可用于PCR扩增的引物对是：