为什么电泳时分子量大的在后面,而色谱柱是分子量大的在前面

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/04/26 18:57:52

琼脂糖是从琼脂中提纯出来的,是由D-半乳糖和3,6脱水L-半乳糖连接而的一种线性多糖.琼脂糖凝胶的作是将干的琼脂糖悬浮缓冲液中,通常使用的浓度是1%-3%,加热煮沸至溶液变为澄清,注入模板后室温下冷却凝聚即琼脂糖凝胶.琼脂糖在DNA备电泳中作为一种固支持基质.琼脂糖之间以分子内和分子间氢形较为稳定的交联结构,这种交联的结构使琼脂糖凝胶有较好的抗对流性质.琼脂糖凝胶的孔可以通过琼脂糖的最初浓度来控,低浓度的琼脂糖形较大的孔,而浓度的琼脂糖形较小的孔.尽管琼脂糖本身没有电荷,但一些糖基可能会被羧基、甲氧基特别是硫酸根不同度的取代,使得琼脂糖凝胶表面带有一定的电荷,引起电泳过中发生电渗以及样品和凝胶间的静电相互作用,影响分离效果.
琼脂糖凝胶可以用蛋白质和核酸的电泳支持介质,尤其适合核酸的提纯、分析.如浓度为1%的琼脂糖凝胶的孔对蛋白质来说是比较大的,对蛋白质的阻碍作用较小,这时蛋白质分子大小对电泳迁移率的影响相对较小,所以适用一些忽略蛋白质大小而只根据蛋白质天然电荷来进行分离的电泳技,如免疫电泳、板等电聚焦电泳等.琼脂糖也适合DNA、RNA分子的分离、分析,由DNA、RNA分子通常较大,所以在分离过中会存在一定的摩擦阻碍作用,这时分子的大小会对电泳迁移率产生明显影响.例如对双链DNA,电泳迁移率的大小与DNA分子大小有,而与碱基排列及组无.另外,一些低熔点的琼脂糖在62 ℃时熔化,此其中的样品(如DNA),可以在加热到熔点的水浴中放置一段时间,重新溶解到溶液中而回收.
由琼脂糖凝胶的弹性较差,难以从小管中取出,所以一般琼脂糖凝胶不适合管状电泳,管状电泳通常采用聚丙烯酰胺凝胶.琼脂糖凝胶通常是形水式板状凝胶,用等电聚焦、免疫电泳等蛋白质电泳,以及DNA、RNA的分析.垂直式电泳应用得相对较少.
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