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关于生物PCR技术通过PCR技术克隆DNA分子与人体内DNA复制相比有什么特殊之处?最好列出PCR技术的突出特点.

来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/04/28 09:01:57
关于生物PCR技术
通过PCR技术克隆DNA分子与人体内DNA复制相比有什么特殊之处?最好列出PCR技术的突出特点.
聚合酶链式反应(英文全称:Polymerase Chain Reaction),聚合酶链式反应
简称PCR.聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点.它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方.聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术.
技术原理
  DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径.双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝.在 聚合酶链式反应
实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链.因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制.  但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展.发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床.
反应特点
  特异性强   PCR反应的特异性决定因素为:  ①引物与模板DNA特异正确的结合;   ②碱基配对原则;   ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;   ④靶基因的特异性与保守性.