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10KD的蛋白怎么离心下来,用多少转速呢,我上次3000rpm好像没离下来……

来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/04/30 08:12:46
10KD的蛋白怎么离心下来,用多少转速呢,我上次3000rpm好像没离下来……
你指的是样品和Loading混合后水煮3min后的那次离心?那么这和你离心没有关系,这次离心的主要目的是去掉不溶的成份.一般loading中含有SDS,水煮后蛋白都是处于溶解状态,很少有不溶的成份.不溶的也并不是蛋白质,所以电泳取的是上清.而且不溶的这部分也不能进行电泳.如果SDS-PAGE没有目的条带,一般原因有两个,1是你选择的凝胶浓度不对,蛋白已经跑出凝胶了.这种情况你得看你的marker是否有10kD的带出现,marker的10kD的带都没有的话,基本可以确定是跑出去了.这种情况你得增加凝胶浓度,10kD的蛋白属于分子量非常小的蛋白了,跑出去的可能性非常大.然后如果你凝胶浓度没有问题的话,那么你就要看你的蛋白是否表达了.我看你用的是菌液,那么你做的应该是外源蛋白的表达吧,如果是的话,那么应该就是蛋白没有表达.你得检查下你的诱导条件是否有问题,诱导剂是否有问题.此外,如果都没有问题的话,你应该去查下你的片段是否正确插入载体了.