我做western,蛋白180KD,请问用多大浓度的分离胶即浓缩胶?
来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:数学作业 时间:2024/05/27 05:46:49
我做western,蛋白180KD,请问用多大浓度的分离胶即浓缩胶?
浓缩胶是固定的 分离胶配稀一点呗 10或者8%的 这么大得多跑跑
再问: 请问有没有关于分离胶浓度与蛋白分子量大小关系的参考文献?谢谢
再答: 不知道 这需要文献么 做WB是靠人品的 呵呵 你就配10%的120V跑2.5H肯定能下来
再问: 这么肯定,那你肯定是行家了,希望能做出来。第一次不知道,用了师兄他们常用的12%的浓度,没出来。
再答: 算不上行家 只是实验需要做过几十次而已 没出来的原因很多 胶的浓度是可能性最小的之一了 不过这么大的蛋白 还是先降低浓度试一下吧
再问: 我用8%的分离胶,2.5小时温度很难控制,电转后条带变花了。
再答: 放在冰里温度不会太高吧 特别是这大蛋白不像小的那么容易弥散
再问: 嗯,温度可能是过高了,但是可能不影响结果,最后β-acting出来了,目的条带还是没出来,我再换用0.45微米的PVDF膜试试,之前实验室的是0.2微米的,看来不行。
再问: 请问有没有关于分离胶浓度与蛋白分子量大小关系的参考文献?谢谢
再答: 不知道 这需要文献么 做WB是靠人品的 呵呵 你就配10%的120V跑2.5H肯定能下来
再问: 这么肯定,那你肯定是行家了,希望能做出来。第一次不知道,用了师兄他们常用的12%的浓度,没出来。
再答: 算不上行家 只是实验需要做过几十次而已 没出来的原因很多 胶的浓度是可能性最小的之一了 不过这么大的蛋白 还是先降低浓度试一下吧
再问: 我用8%的分离胶,2.5小时温度很难控制,电转后条带变花了。
再答: 放在冰里温度不会太高吧 特别是这大蛋白不像小的那么容易弥散
再问: 嗯,温度可能是过高了,但是可能不影响结果,最后β-acting出来了,目的条带还是没出来,我再换用0.45微米的PVDF膜试试,之前实验室的是0.2微米的,看来不行。
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