关于TA克隆测序结果的几个问题,用的是PMD19-T Vector.

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：综合作业时间：2024/05/22 06:21:52

关于TA克隆测序结果的几个问题,用的是PMD19-T Vector.
1 怎样看是否连接成功?
2 有的序列是用F测定的,有的是用R测的,怎样调到一个方向比对?
谢谢啦!

1.直接用F或R测序,看有没有插入片段；或拿载体两端的特定的限制性酶切一下质粒,看有没有片段切出来；
2.用生物学软件比如DNAMAN等得到反向互补序列,再比对,
再问：我把我的结果和T载体的序列比对，大多数都是一端和载体一样，另一端多出一些大小和我想要的差不多的片段。有一个和载体完全一致，那就是失败了，是吧？同一个种我挑了两个菌斑，可是结果不太一样，怎么回事啊？
再答： 1.若多出一些片段，表明载体中插入了基因片段，具体插入的是什么基因，可以到NCBI上BLAST 一下。若与载体完全一致，表明未插入目标片段，可以排除。 2.两个菌斑结果不一样很正常，有可能你在做连接的时候插入的是引物二聚体，这种情况经常会发生。

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