挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：综合作业时间：2024/06/01 15:42:57

挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有
做分子克隆时,铺板长出很多菌落,于是挑克隆鉴定.PCR扩增目的基因有目的条带,但是酶切重组质粒又只有一条带,酶切时间已经延长至过夜了.挑了好多克隆都是这样,

可能原因：
1.PCR扩增的是假克隆,因为PCR验证的可靠性不稳定.
2.质粒中酶切位点变异
你可以做如下实验：
1.看重组质粒的大小是不是比原始质粒大
2.用提出的质粒做pcr,这样比较可靠,用细菌做pcr的假阳性极高
3.用别的酶再试一下,是否能切出目的片段.
祝实验成功

转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带. 我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带! 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀菌液pcr可以拉出目的条带,但是质粒抽出来酶切结果说是没有插进去,为什么? PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么? 菌液pcr检测目的条带很明显但是有弱杂带是怎么回事 RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些? 我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. 在做载体构建的时候,PCR时有目的条带,但是摇菌酶切没有东西,请问是怎么回事啊?