作业帮我要测染色体上某一个基因,如何获得 这个基因,及如何判定这个基因就是你想要得到的
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/28 13:19:15
我要测染色体上某一个基因,如何获得 这个基因,及如何判定这个基因就是你想要得到的
你知道这段基因两端的序列吗?
可以从NCBI上查（前提是有人测过）,查出来之后根据两端的序列设计特异性引物,提出基因组DNA,PCR （要用最保守的enzyme,不要有错配）.之后跑电泳,看长度对不对,对的话应该就是你要的,不对的话把长度对的PCR产物从胶上切下来回收.
再问： 要是测这个基因是否发生突变用哪个方法
再答： 找两端的保守区设计引物，就是基本上不会发生突变的区域，这个要多查文献，基本上文献中会说哪些点容易突变。 如果片段短的话可以连在质粒上测。主要有以下步骤： 1.建议设计引物时在引物两端加入酶切位点，然后PCR（注意用保守的DNA聚合酶，不然会有错配)，跑电泳检测产物的长度，如果对的话切胶回收。 2.酶切PCR产物及质粒，再跑电泳，回收长度正确的片段，连接到酶切后的质粒上。 3. 用抗生素和蓝白斑筛选看PCR产物是不是插进质粒了。 4a.用插入片段两端的质粒序列设计引物（注意要在插入序列两端留出100bp左右的长度，原因是测序仪测不出前几十个碱基，给引物取个名字，如pf,pr），PCR，电泳看看插入的长度对不对（这个时候可以不用保守的DNA聚合酶，最便宜的taq酶就可以）。 4b.或者扩增单菌落，提质粒，酶切质粒，通过酶切片段大小看插入的长度是不是对。如果长度对的话就可以正式进行测序了。 5. 测序的过程很简单，用你根据质粒序列设计的引物pf 或者pr进行测序,【不可以两个加到一个tube里，那成PCR了：）】。如果插入的序列很短，低于500bp（最长800bp,如果你有很好的加样技巧的话），只需要进行一个方向测序就行，大于这个长度要用pf和pr分别测序。测出来之后和没有突变的序列比对一下就知道是不是突变了。 看上去挺复杂的吧，一般硕士研究生阶段的分子生物学实验半个学期都在做类似的实验。如果你从没有做过这样的实验可能会比较麻烦的，有熟手带着你就容易多了。
可以从NCBI上查（前提是有人测过）,查出来之后根据两端的序列设计特异性引物,提出基因组DNA,PCR （要用最保守的enzyme,不要有错配）.之后跑电泳,看长度对不对,对的话应该就是你要的,不对的话把长度对的PCR产物从胶上切下来回收.
再问： 要是测这个基因是否发生突变用哪个方法
再答： 找两端的保守区设计引物，就是基本上不会发生突变的区域，这个要多查文献，基本上文献中会说哪些点容易突变。 如果片段短的话可以连在质粒上测。主要有以下步骤： 1.建议设计引物时在引物两端加入酶切位点，然后PCR（注意用保守的DNA聚合酶，不然会有错配)，跑电泳检测产物的长度，如果对的话切胶回收。 2.酶切PCR产物及质粒，再跑电泳，回收长度正确的片段，连接到酶切后的质粒上。 3. 用抗生素和蓝白斑筛选看PCR产物是不是插进质粒了。 4a.用插入片段两端的质粒序列设计引物（注意要在插入序列两端留出100bp左右的长度，原因是测序仪测不出前几十个碱基，给引物取个名字，如pf,pr），PCR，电泳看看插入的长度对不对（这个时候可以不用保守的DNA聚合酶，最便宜的taq酶就可以）。 4b.或者扩增单菌落，提质粒，酶切质粒，通过酶切片段大小看插入的长度是不是对。如果长度对的话就可以正式进行测序了。 5. 测序的过程很简单，用你根据质粒序列设计的引物pf 或者pr进行测序,【不可以两个加到一个tube里，那成PCR了：）】。如果插入的序列很短，低于500bp（最长800bp,如果你有很好的加样技巧的话），只需要进行一个方向测序就行，大于这个长度要用pf和pr分别测序。测出来之后和没有突变的序列比对一下就知道是不是突变了。 看上去挺复杂的吧，一般硕士研究生阶段的分子生物学实验半个学期都在做类似的实验。如果你从没有做过这样的实验可能会比较麻烦的，有熟手带着你就容易多了。