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T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,

来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/04/30 19:51:07
T载体连接问题
现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到大肠杆菌中挑斑验证时用同样的嵌套引物去验证却没有扩增出条带,请问这是为什么啊?
分析原因可能有:
1、T载体连接有问题,重新调整目的片段和T载体的比例,重新连接.
2、PCR某种试剂出问题了,以前有个师姐就是这样,怎么也扩不出来,让别人带样扩出来了,原来是Taq 酶出问题了,你也可以确定一下.