pcr条件设定：我要p一个2000+bp的片段 pcr条件怎样设

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/05/19 05:47:56

pcr条件设定：我要p一个2000+bp的片段 pcr条件怎样设
我的两个引物都是33bp GC含量为43% p过两次都是引物二聚体

原因分析：二聚体问题,基本可以确定为引物设计不当——你的引物很长,一般2kb的片段,有22bp的引物就足够了,你这么才长的引物,非常容易形成发夹结构,或者其他互补情况,最后形成二聚体.另外,你的引物CG含量有点低,弄到55%会稳定很多.
解决方法：首先,你应该尝试低温退火+热启动的PCR方法,具体为：首次循环加热到95度后,暂停PCR,开盖,逐个加入PCR酶,然后降低退火温度,可以做一个梯度,每次降低一度试试.如果上述方法不行,你应该重新设计引物,保证16-18个配对碱基的前提下,用软件模拟避免发卡结构和引物互补,保证GC含量在55%左右.
再P不出来,你就查你的目的基因序列去,肯定弄错序列了

大片段的RT-PCR现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过 pcr 一段2000多bp的基因引物设计时条件怎么设包括引物长度 gc含量等因为我用软件设计时总是设不出来可以 pcr的反应条件是什么帮我看看pcr反应条件 PCR的反应体系要具有什么条件? 做ISSR 的PCR条件优化请问什么是“复原条件PCR”?复原条件PCR的原理,目标分别是什么呢? pcr 条件我做了IGF-1基因5'调制区的,按照别人发的文章条件跑的PCR,自己又优化了条件,结果PCR产物经检测,有 PCR条件优化请问高手PCR产物目的条带以下有杂带,PCR条件该如何优化? realtime PCR 做实时荧光PCR,就用染料的那种,是不是有要求PCR的片段,一般在100BP左右? 我在做overlap PCR,两个片段一条736bp,一条255bp,20个重叠碱基,四个引物的TM值都是59度,两条都 PCR的退火温度怎么设定