以革兰氏阳性菌基因组为模板,目的片段500bp左右,体系为,模板1μL,dNTP 2μL,引物1μL,Taq 0.2μL

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/05/16 02:34:24

以革兰氏阳性菌基因组为模板,目的片段500bp左右,体系为,模板1μL,dNTP 2μL,引物1μL,Taq 0.2μL
退火温度是50°C,但是PCR后没有目的条带,只要二聚体,引物已经设计两次了,请问可能是什么问题?

1 退火温度不好,可以把退火温度设置一个梯度,比如说45℃到55℃,再试一试.
2 高温变性没有做好,看基因片段的CG含量来设置变性温度,CG含量高,变性温度就要相对高点.
3 引物还是没有设计好.也有这个可能
再问：但是，我要特定的片段长度，所以引物的可变的范围很小，而且我要做融合PCR，下游引物带有18个bp的尾巴，不知道有没有影响。GC的含量是正常的，合成的引物单上Tm值是60和65°C，我就是怕跑不出来，特地把退火温度设成50度？请问还有没有其他原因造成这种情况，不然我可能还是要归结到引物的问题上
再答：貌似一般来说退火温度=Tm-5，那就是55跟60了，一般PCR仪器可以把梯度设置个10~15℃的，把这两个温度设置进去，跑得试一下看有没有结果。再没有，估计得着引物的问题了。

Taq聚合酶如何使DNA模板—引物结合物形成dNTP. 弱弱的问个问题,现在有三十二对引物,浓度为100μM,做10μl的PCR反应体系,上下游引物各需5pmol,我该怎怎么稀 PCR引物设计问题如果我设计的引物,扩增出来的目的片段长度为200BP,但是石蜡包埋组织提取出来的DNA模板大多数在10 长为L(L 定长为L(L 在矩形ABCD中,由8个面积均为1的小正方形组成的L形模板如图放置,则矩形ABCD的周长为矩形ABCD中,由8个面积为1的小正方形组成的L形模板如图放置,则矩形ABCD的周长为多少如图所示的矩形ABCD中,由8个面积均为1的正方形组成的L型模板如图放置,则ABCD的周长为 μg/l mg/l 换算 L为容积单位1L是不是1升如图,矩形ABCD中,由8个面积均为1的小正方形组成的L型模板如图放置,则矩形ABCD的周长为_____ 如图,矩形ABCD中,由8个面积均为1的小正方形组成的L型模板如图放置,则矩形ABCD的面积为?