作业帮Clontech公司的SMART cDNA文库构建试剂盒都有哪些东西,里面有哪些试剂?
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：英语作业 时间：2024/05/01 13:48:49
Clontech公司的SMART cDNA文库构建试剂盒都有哪些东西,里面有哪些试剂?
这是说明书,试剂在步骤里面
反转录采用BD Clonetech公司的Switching Mechanism At 5' end of the RNA Transcript (SMART)技术.
1) 在1.5 mL离心管中加入：
10 µL XXX mRNA
1 µL 12 µM的3' BD SMART CDS Primer II A
1 µL 12 µM 的BD SMART II A Oligonucleotide
2) 72℃下培育2 min,冰浴2 min
3) 在离心管中加入：
4μL 5X first-strand buffer
2 μL 100 mM DTT
1 μL of 10 mM 50dNTPs
1 μL Superscript II reverse transcriptase (200 units/μL)
4) 混匀,42℃培育1h
5) 75℃,15 min
Long Distance PCR扩增：
将下列试剂放入预冷的离心管中：
10μL反转录产物
2 μL of 10 mM dNTP mix
1 μL of TaqPlusLong 10X low-salt buffer
1 μL of TaqPlusLong DNA polymerase (Stratagene,La Jolla,CA)
2 μL of PCR primer
加双蒸水补足至100μL
PCR反应条件为：
94℃,5 min；
94℃,30 sec,
48℃,30 sec,
72℃,30sec,35个循环,
最后72℃延伸5 min.
反转录采用BD Clonetech公司的Switching Mechanism At 5' end of the RNA Transcript (SMART)技术.
1) 在1.5 mL离心管中加入：
10 µL XXX mRNA
1 µL 12 µM的3' BD SMART CDS Primer II A
1 µL 12 µM 的BD SMART II A Oligonucleotide
2) 72℃下培育2 min,冰浴2 min
3) 在离心管中加入：
4μL 5X first-strand buffer
2 μL 100 mM DTT
1 μL of 10 mM 50dNTPs
1 μL Superscript II reverse transcriptase (200 units/μL)
4) 混匀,42℃培育1h
5) 75℃,15 min
Long Distance PCR扩增：
将下列试剂放入预冷的离心管中：
10μL反转录产物
2 μL of 10 mM dNTP mix
1 μL of TaqPlusLong 10X low-salt buffer
1 μL of TaqPlusLong DNA polymerase (Stratagene,La Jolla,CA)
2 μL of PCR primer
加双蒸水补足至100μL
PCR反应条件为：
94℃,5 min；
94℃,30 sec,
48℃,30 sec,
72℃,30sec,35个循环,
最后72℃延伸5 min.
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