实际在做PCR时需要加入哪些组分?各组分的浓度如何确定
来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/04/28 20:49:50
实际在做PCR时需要加入哪些组分?各组分的浓度如何确定
dNTP,含镁离子的 PCR buffer,上游引物,下游引物,taq酶,模板DNA.至于浓度,实际上说明书上都写着有,市售的taq聚合酶都带有10X的含镁离子的PCR buffer,这个使用时稀释10倍就可以保证浓度了,也就是说50ul的反应体系加入5ul.dNTP的话一般是50ul的反应体系加入4ul 2.5 mM的dNTP.引物的浓度一般是每50ul反应体系加入上下游引物各1ul浓度为20uM左右的引物储存液.酶的话还是看酶的说明书,一般taq聚合酶的推荐是每50ul加入2.5个酶单位左右.模板DNA要根据模板DNA的大小来确定加入浓度的,一般模板DNA片段越小加入的量就越小,反之越大.但总50ul反应体系中,最多不要超过10ug左右.
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