RT-PCR做不出来我是一个新手,我现在在做反转录,在PCR,可是我扩了好几次,就是做不出什么,我排除了试剂的问题,就是

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：综合作业时间：2024/04/28 19:31:05

RT-PCR做不出来
我是一个新手,我现在在做反转录,在PCR,可是我扩了好几次,就是做不出什么,我排除了试剂的问题,就是手法问题,

建议你先找一现成的DNA模板及相应的引物,然后做PCR,如果做出来了说明PCR体系没有问题.那问题就可能是出在反转录上了,RNA提取好之后可以跑个电泳或者检测OD值,以确认RNA提取是否成功.另外,检查是否用错反转录引物?针对不同的RNA样本类型要使用不用的反转录引物,病毒细菌之类的用随机引物作反转录引物,动植物RNA用OligodT（我们实验室用17个T的引物）作为反转录引物.

RT-PCR做不出来我是一个新手,我现在在做反转录,在PCR,可是我扩了好几次,就是做不出什么,我排除了试剂的问题,就是请问,我反转录时设置了2个循环,cdna还可以做半定量PCR吗?Actin的pcr在500bp单一条带. 反转录PCR的目的我是做转基因的转出来后老板让我做反转录PCR做那个干啥啊?我想问下对我试验有什么意义呢？我在做实时荧光定量PCR~为什么做样的时候要加入两样东西（反转录后的cDNA和质粒）我做的实验是提取总的RNA,然后反转录,再PCR,最后出来的结果是这样的见图,我的目的条带为500bp 普通的RT-PCR 和荧光定量PCR,在反转录这一步是不是一样的? 为什么我的RT-PCR内参跑不出来.目的条带到是跑出来了我现在提的DNA的OD值都在1.8左右,含量也在300左右,但是为什么用mix做PCR的时候,做不出来? 请问,GAPDH作为RT-PCR内参的原理是什么呀?我知道为什用它做内参了,就是不清楚怎么用它, 一个基因转录后存在不同的剪接体,我需要做反转录PCR扩增该基因所以mRNA,怎么选mRN PCR的电泳图,为什么老有这种情况,到底哪方面出了问题呢,我经常做PCR然后就是跑胶,时好时坏,自认为每次的操作都是一样如何检测cDNA我做RT-PCR想在PCR之前检测下我的cDNA看下逆转录有没有问题,请问高手如何检测,跑电泳可以吗,那