菌落Pcr阴性对照总有条带

那就是PCR的问题了,建议用新的试剂再试下,最好先把反应液,酶,引物按比例先配好,再取混合液加引物

阳性对照是用来检验你的实验操作有没有问题,阴性对照是用来检验你的实验材料有没有问题,所以PCR中阳性对照是要加入你要P的基因,跟引物配对,是一定能P出条带的,而阴性对照就是加入空载体,是不能P出条带的

如果PCR系统没有问题,很可能是质粒和染色体发生了重组.建议提细菌的genomeDNA做一次PCR.如果是阳性,就说明是这样.另外,还可以另挑几个菌落,重新提质粒扩增.

我觉得用elutionbuffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水.我们一般用水就行.实在不行去测序呀.提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大

高手们好.最近做酶切连接转化,最后做鉴定时,以菌落为模板进行PCR时可以见到有目的条带；当把菌落接种到LB液扩菌后,以菌液为模板进行PCR时却什么东东都没有?请问会是什么原因啊?多多指教啊!建议重新以

就只是你的目的基因菌液PCR扩增不出来么?不过我觉得你如果质粒、电泳、菌落PCR都能验证的话,菌液PCR结果如何都意义不大了.

这很正常,一般做蓝白斑挑斑会更精确,不过现在的连接酶成功率很高,不少已经达到90%以上,但仍然存在只转化了质粒而未连接成功目的条带的菌落.所以挑斑时一般要多挑几个,而且选单菌落,可以画圈圈分散开来挑斑

阴性对照涂布的应该是没有转质粒的空菌吧?我觉得可能有三个原因：1,你的amp平板失活,可能是你加抗生素的时候培养基温度太高.如果这样,你的平板就相当于是无抗的.2,无菌操作失误,带入了其他有抗性的杂菌

利用菌落作为模板进行PCR扩增,验证该菌落里是否带有目标片段.但是由于PCR是一个级联放大的过程,所以即使菌落中不含有目标片段,而是菌落表面沾有一部分之前连接,转化中用的目标DNA,也会导致PCR获得

阴性对照的作用就是来判断实验是否有污染的,如果PCR条带和阴性对照都弥散的话,原因应该是污染.污染一般有试剂的污染,也有可能是环境的污染.先说试剂的污染.你设置的阴性对照所用的每一种试剂都存在被污染的

恐怕还是cDNA的问题,actin因为量比较丰富,所以即使破坏一些仍能P出来,但你的目的基因就不同了

1,如果试验中用到缓冲液、稀释液等,可以说明该些缓冲液稀释液是无菌的,不影响正常实验结果的.2,可以说明在整个试验操作过程中,步骤方法操作都得当整确,无微生物带入.因此,如果阴性对照平板上有菌落,可能

主要看你的CT值大约是多少,如果很大（大于40循环）那么可以判定结果没有问题,如果跟目的基因的CT一致或者为其他CT值那么判断为模板造成的气溶胶污染或者其他外缘DNA造成的污染.另外你阴性对照加的是水

取1ml菌液离心去培养基或者刮取少许菌苔,加入100μl无菌水混匀.EP管放入冷水中,然后开始加热,让菌液慢慢升到100℃,而不是在水已经沸腾的时候加入菌液去煮.沸腾开始后计时,十分钟后迅速放入-20

有很多影响因素：模板浓度,引物浓度,酶在反应过程中的不断消耗,循环数和温度等等.如果你已经P出来目的片段的话温度应该是适合的,可以加大模板和引物的量,建议回收片段后作为模板再P,这样得到的片段会较亮.

酶切位点消失啦,测个序看看.再问：测序了，说我的链接质粒没有信号再答：重新做吧，多半不对！

可能是菌的基因组DNA,不过基因组DNA是很大的,不只2k还有可能呢,是引物特异性不好,从转入质粒上克隆出了你的目的片段,但从菌基因组或者质粒序列上扩出来一个非特异

供体菌相应位点的染色体没有交换到受体菌上,而且受体菌本身不能被该选择性培养基选择.你可以再做一组供体菌的对照试验,看看能不能生长.这种转化本身发生频率就很低,样本一定要多.

PCR扩增的结果和模板的质量有直接的关系,在PCR扩增中如果模板纯度高,很低的量都可以进行扩增的.提取细菌的DNA量不多但纯度高,即使DNA电泳检测不到条带,PCR仍然能扩出条带.希望你看明白了.

有抗性吗?菌扩增,应该是重组质粒有转化进去的.菌液PCR建议：上游引物：选择载体上的一段序列下游引物：选择目的基因的反向引物这种假阳性可能性很小再问：这样不就要重新设计引物了?我最大的问题是明明是从有