菌落PCR的条带很暗

如果实验目的只是基因型鉴定,对PCR产物无其他要求的话,二聚体并非不能忍受,可以尝试以下方法优化反应条件：1.确定DNA模板为阳性,即确定含有目标序列；2.对退火温度设置温度梯度,琼脂糖电泳检测是否有

存在两种可能性,第一,引物设计错误,可以将引物和参考序列进行拼接后看看能不能顺利拼接,以及拼接之后的目的片段长度；第二,可能是非特异扩增,这个时侯如果确定引物位置没有问题,可以调整退火温度,以及PCR

你的电泳缓冲液和制胶缓冲液浓度不准或者脏了吧?换新的电泳缓冲液和制胶缓冲液试试.marker都出问题说明是你的胶的问题,或者电泳操作的问题.

可以照胶的时候去调节亮度,对比和γ射线,然后会清楚一些.同时,你优化下PCR扩增条件之类的,提高扩增效率.希望对你有帮助.望采纳.再问：感谢回答，我会试试调节亮度。请问，这跟电泳时使用的染色液有关系吗

博凌科为生物科技-为你直接挑曲单克隆,一般使用特异引物,在体系中进行PCR即可,细胞热解后DNA释放就能进行PCR扩增~

高手们好.最近做酶切连接转化,最后做鉴定时,以菌落为模板进行PCR时可以见到有目的条带；当把菌落接种到LB液扩菌后,以菌液为模板进行PCR时却什么东东都没有?请问会是什么原因啊?多多指教啊!建议重新以

这很正常,一般做蓝白斑挑斑会更精确,不过现在的连接酶成功率很高,不少已经达到90%以上,但仍然存在只转化了质粒而未连接成功目的条带的菌落.所以挑斑时一般要多挑几个,而且选单菌落,可以画圈圈分散开来挑斑

一个可能原因,DNA结合了蛋白质,所以跑不出去.加loadingbuffer后加热（90度以上）一下再上样试试.另外一个原因,你的产物特别大（不一定是目标产物）再问：我做的是菌落PCR电泳检测结果，我

利用菌落作为模板进行PCR扩增,验证该菌落里是否带有目标片段.但是由于PCR是一个级联放大的过程,所以即使菌落中不含有目标片段,而是菌落表面沾有一部分之前连接,转化中用的目标DNA,也会导致PCR获得

恐怕还是cDNA的问题,actin因为量比较丰富,所以即使破坏一些仍能P出来,但你的目的基因就不同了

主带显著的情况下,很可能是引物聚合体.如果没有出现显著的你想要的主带,则是非特异扩增产物.第一种情况没事不用理会,第二种情况需要筛查模版中与引物的非特异性互补区,重新设计引物,或者升高退火温度试试.

取1ml菌液离心去培养基或者刮取少许菌苔,加入100μl无菌水混匀.EP管放入冷水中,然后开始加热,让菌液慢慢升到100℃,而不是在水已经沸腾的时候加入菌液去煮.沸腾开始后计时,十分钟后迅速放入-20

首先试剂应该没有问题,现在连作为marker的基因都扩不好,那么一个是你的引物有问题,另一个就是反转录出问题了.遇到这样的问题应该一步一步的排除.首先确定反转录没有问题,一般的鉴定办法是扩增marke

首先要看你的条带是否清晰,虽然亮度不够但是清晰度应该高,没有拖尾没有非特异条带和引物二聚体,如果以上都没有,仅仅是目标条带不够亮的话,我觉得你可以将25微升体积同比放大至50微升反应体系,相应的制胶的

可能是菌的基因组DNA,不过基因组DNA是很大的,不只2k还有可能呢,是引物特异性不好,从转入质粒上克隆出了你的目的片段,但从菌基因组或者质粒序列上扩出来一个非特异

博凌科为-为你你用的凝胶染色剂是EB还是Goldview,如果是后者,那Marker一般都跑的不理想.

很宽极有可能是扩增出两个或多个大小相近的片段,这种片段测序结果往往都是乱封,是多个序列测序结果叠加在一起的.解决办法,更换特异引物,或者胶浓度加大,比如2%的.电泳时间久一些,比如40分钟,就有可能将

PCR扩增的结果和模板的质量有直接的关系,在PCR扩增中如果模板纯度高,很低的量都可以进行扩增的.提取细菌的DNA量不多但纯度高,即使DNA电泳检测不到条带,PCR仍然能扩出条带.希望你看明白了.

1退火温度不合适2引物不合适3模板有问题4酶由问题

首先怀疑,特异性不好,解决办法：1,可能是模板量过高,降低模板浓度10-1000倍；2,适当提高退火温度1-3度,或者先用高于你以往退火温度的1-3度先p上5个循环,再用先前温度p剩余的循环（也就是在