在克隆启动子时反向引物包含起始密码子,连到GFP载体没有荧光是怎么回事

正反向引物就是一个引物是从3端开始,另一个是从5端开始的.看分子生物学的书吧,里面有详细介绍DNA复制的啊,就是那些理论而已.解释的太简单了,我做过pcr扩增的实验,不懂得可以问我,我尽量回答.

首先要看目的基因中是否含有该酶切位点,只有没有的才可以选.其次,如果需要做表达,需要考虑起始密码子,防止移码突变；第三要考虑标签用于后面的蛋白纯化.如果仅仅用来拿到目的基因,那只需要第一点即可再问：我

可以这样来说吧,首先你应该有一条已知的序列,反向引物设计时在序列的5'方向找一段序列然后反向互补作为反向引物,在3'方向直接找一段序列作为正向引物.这样就OK了,这是引物的设计,至于其他条件可以参考相

你看,你分别获得了1-1200nt以及1000-1400nt这两段序列,那么中间有200bp长度的序列是重叠的,对吧?也就是说你已经从序列信息上获得了这个CD区所有的序列信息.如果你只是需要序列信息的

构建载体需要酶切的,所以需要加接头的!

如果只想做序列的克隆,那么引物往两端延伸没问题.如果要做蛋白表达的话起始端必须是起始密码子.引物不可以在起始密码子之前,否则影响表达起始.扩不出来的话,首先分析一下序列,是否GC含量较高.然后尝试一下

正向引物和反向引物是相对的通常以一个双链DNA（上面的那条链）的上游结合部位称为正向引物是从左到右的方向,也就是5-3的方向而下面那条互补链的下游结合部位称为反向引物其方向是从右到左的因为下面的链的方

酶切位点多数时候是反向回文结构,因此你看到的正向序列与反向互补序列是相同的,所以在两个方向的引物上看,酶切位点序列完全一样.

就问题本身而言,引物合成回来是固体粉末,你把它溶于水中,再做一步变性退火就行了（不过由于是hairpin,形成二聚体的可能性也很大,这个似乎不可避免）.另外我不太明白为什么要用hairpin的引物?在

额定功率前进,那这道题就是匀加速直线运动.初始速度为V0,最大速度为V末.那中间时刻速度为V平=（V0+V末）/2.(其中V0=0）位移=V平*t（时间）==（V0+V末）/2*t=V末/2*50至于

一定要的.正向引物：5'.CTTCGAAATTC3'反向引物：5'.CCGATCGGGAGA3'回答楼主的补充问题：设计正向引物时,该引物序列应该具有和你待扩增DNA序列接近5‘段处的序列.反向引物设

可能是模板结构问题,多试几种PCR试剂,个人觉得Takara的LA扩增能力比较强

普通PCR是基因克隆的基础,原理一致.基因克隆在于所扩的序列是未知的,现在很多生物的全基因序列已经公布,多重序列比较设计简并引物,克隆出保守区域的片段,在通过RACE等方法把上下游的序列扩出来.

为了保证复制的高保真性.因为5’新合成的链没有经过3’到5’的校正,可能会有一些偶然发生的错配.而引物为RNA,可以方便的与DNA区别,被生物体所识别,并随后校正.

都不需要引物的原核的话activatorprotein结合在调节基因、RNA聚合酶结合在启动子上之后就可以开始转录了.真核的话稍微麻烦一点,需要activatorprotein结合在增强子上、还有多种

DNA在单链情况下没有RNA稳定!容易发生变异!

克隆基因的编码框时,必须从ATG开始或UTR处开始.当你想表达这个基因时,PCR产物必须包括完整的读码框；当你需要该基因融合GFP时,不仅需要从ATG开始,终止密码子必须突变掉,而且目的基因与GFP必

建议你先上网学习一下引物设计最简单的一些知识我设计引物是用Omiga软件的,使用比较简单,只要新建一个核酸文件,把目的基因序列粘贴进去,扩增全长的话一般都是手工选取18～22bp长度,再加入内切酶碱基

正向启动ForwardStart,反向启动OpositeStart,换带装置控制箱电气原理图Bandswitchingdeviceofcontrolboxelectricalprinciplediag

你是克隆到T载体上的吗?你回收的片段有多大?有可能是测序结果里面不包含你的引物段.要知道,测序结果8,9百bp后面的结果都是不准确的.再问：是到T载体上的，片段大约是600bp再答：这样呀，那你再送个