不同批次做的内参ct值相差10

看看你的GAPDH引物Tm多少,有可能是因为PCR条件适合目的基因引物对而不适合内参引物对吗?再问：不知道，我是个新手什么都不懂再答：那么童鞋，你还是找一个师兄师姐前辈高人带一下。网上这样问很难问出来

可以.定量PCR内参的选择最重要的是这个基因在不同个体之间的此组织（比如是肌肉）表达恒定.所以你需要找好了.

要在生物体或细胞内稳定表达的基因才能作为PCR的内参基因,因此又名看家基因,由于在不同细胞、组织中常量表达,没有组织特异性,因此不同昆虫之间可以共同使用内参.再问：那引物是根据自己的物种去具体设计还是

一般认为一些持家基因的表达量在不同状态下变化不大,所以可以认为它们表达是恒定的,故而用来做内参简而言之,就是你有两个样品（譬如不同生长条件或者不同组织的）,要比较其中某基因A表达转录变化,就分别比较两

这个要看你在做PCR前的加样量是否一致.如果加样量是一致的,而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题.理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样.如果你能肯定加样

进一步检查肝肾彩色多普勒,如有必要,再查一下肝脏的加强CT扫描或者是核磁共振.

啥都没有的话是无法设计的首先你可以克隆获得内参的序列,再进行下一步实验再问：如果是想用18srRNA这个内参，我该怎么设计引物来得到这段序列呢？再答：这个在各个物种中的同源性很高的，你可以直接用其他物

理论上是越一致越好.如果有很大的差异,说明实验有较大的误差,或者样本有降解.

请问你做RealTimePCR做几个循环的?40个吗?40个循环的话,CT值在30左右很正常的啊,CT值30的话大概是10000copies,说明模板含量低嘛,定量定量就是要CT值有大有小的才有比较嘛

没有关系,可以继续按正常步骤计算.内参的CT值通常要控制在25-30,目的基因CT值高,只说明目的基因表达量比较低..没关系..

【7】.与IT一起讨论并且尝试改善系统的功能.DiscussionwithITisdoneandmakeanattempttoimprovethefunctionofthesystem.①：提高系统对

啥叫不同阶段只要模板不同就要检测内参标准曲线是指拿已知浓度的标准品做出来的曲线不是一个概念

△△Ct=△Ct(试验样品)—△Ct(基准样品)△Ct(试验样品)=Ct（试验样品,目的基因）—Ct（试验样品,内参基因）△Ct(基准样品)=Ct（基准样品,目的基因）—Ct（基准样品,内参基因）2－

用内参的方式进行realtime定量是不需要考虑加样量和反转录效率的问题的,因为结果都是和内参比,和内参同多同少.realtime不准是很常见的事,rna降解、引物特异性差、模板太浓或太稀等等许多因素

不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量（CT值差）过大,用内参基因来衡量目标基因的

2-ΔΔCt法.定量的作用是比较两个或多个样本（前提是细胞数目要相等）基因表达量差异的,基因拷贝数/内参拷贝数只是一个样本的相对定量值.内参的作用只是消除样本间细胞数目的差异.

这样子调内参基因的条带似乎是不严谨的．理论上来说,如果你用相同总量的cDNA或DNA模板,并用相同的内参基因引物对,相同实验条件和循环次数,你应该得到相同的内参基因条带,这才能证明你的每次实验操作是可

CT值:0Hu是水-1000是空气1000是骨头-70---90是脂肪30-50是软组织.CT值就为了了解片子上某个部位到底是什么成分.其余没什么用

1.protein-blot之前用Bradford测一下总蛋白量,估摸一下2.做完第一次后,用photoshop软件测一下各个内参条带的光密度值,这样可以给第二次调整的时候一个参考.

做定量PCR中用到的是一段表达量比较稳定的基因一般作为对照就是说您在做RT-PCR事为了去除不同标准本再RNA得产量,质量,以及逆转录效率上可能纯在的差别而获得目标基因特异性表达的真正差异,通常选择内