考马斯亮蓝G与考马斯亮蓝G-250是一个东西么?我要测蛋白质含量,用考马斯亮蓝G可以么?

考马斯亮蓝G与考马斯亮蓝G-250是一个东西么?我要测蛋白质含量,用考马斯亮蓝G可以么?

将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95％乙醇,加入100ml浓磷酸,然后,用蒸馏水补充至200ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定.
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考马斯亮蓝：
化学性质
考马斯亮蓝有G250和R250两种.
考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收.其光吸收值与蛋白质含量成正比.
考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色.
考马斯蓝染色
coomassie blue staining
又称Bradford法,由于其突出的优点,正得到越来越广泛的应用.
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种.考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收.其光吸收值与蛋白质含量在一定范围内成正比,因此可用于蛋白质的定量测定.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定.该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法.
考马斯亮蓝有G250和R250两种.其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定.考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色.
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量.如核糖核酸酶或溶菌酶.去污剂的浓度超过0．2％影响测定结果.如TritonX-100、SDS、NP-40等.
1．Bradford浓染液的配制：
将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95％乙醇,加入100ml浓磷酸,然后,用蒸馏水补充至200ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定.
2．标准曲线蛋白质样本的准备：
尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗体,可用纯化的抗体作为标准.如果待测样本是未知的,也可用抗体作为标准蛋白.通常在20ug—150ug／100ul之间绘制标准曲线.
3．溶
将待测样本溶于100~1缓冲溶液中,该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS).
4．稀释：
按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,如出现沉淀,过滤除去.
5．作用：
每个样本加5ml稀释的染料结合溶液,作用5～30rain.染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度.注意,显色反应不得超过30min．
6．计算：
根据标准曲线计算待测样本的浓度.