RT-PCR 中 反转之后 PCR部分 DNA 的用量
来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/03/29 03:08:41
RT-PCR 中 反转之后 PCR部分 DNA 的用量
我用2ug RNA 25ul体系做完反转后 pcr部分用TAKARA的TAq酶 参考是50ul体系:给的模板用量参考是:人基因组DNA 0.1-1ug ,大肠杆菌的10-100ng ,入DNA 0.5-5ng,质粒DNA 0.1-10ng.我用的是大鼠心脏组织提取的RNA 反转的,我DNA该用多少质量的,能找到我反转的20ul体系里有多少ug的cDNA吗?我看了 索莱宝 TAq酶的参考也是50ul体系,酶都是5U/ul规格的,两家公司在这个50ul体系中所含的 buffer 、dNTP 、镁离子都一样,但引物和酶:takara是 上下游引物20uM 各1ul &TAq 0.25ul,索莱宝是 上下游引物 10uM各 1ul& TAq 0.5-1ul.相差怎么这么大,怎样的比例合适?
我用2ug RNA 25ul体系做完反转后 pcr部分用TAKARA的TAq酶 参考是50ul体系:给的模板用量参考是:人基因组DNA 0.1-1ug ,大肠杆菌的10-100ng ,入DNA 0.5-5ng,质粒DNA 0.1-10ng.我用的是大鼠心脏组织提取的RNA 反转的,我DNA该用多少质量的,能找到我反转的20ul体系里有多少ug的cDNA吗?我看了 索莱宝 TAq酶的参考也是50ul体系,酶都是5U/ul规格的,两家公司在这个50ul体系中所含的 buffer 、dNTP 、镁离子都一样,但引物和酶:takara是 上下游引物20uM 各1ul &TAq 0.25ul,索莱宝是 上下游引物 10uM各 1ul& TAq 0.5-1ul.相差怎么这么大,怎样的比例合适?
1)引物在两个条件下都是过量的
2)酶是主要看扩增效率和保证性,量多几个U和少几个U没有很大影响
3)要是你要看基因表达差异的话,用相同的体系就好了,cDNA量也需相同.
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