作业帮转化大肠杆菌超级感受态（购买）已经1年不成功,我实在没办法,只有发帖求助了,望热心有志之士不吝赐教!
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：语文作业 时间：2024/04/28 07:57:01
转化大肠杆菌超级感受态（购买）已经1年不成功,我实在没办法,只有发帖求助了,望热心有志之士不吝赐教!
转化前载体与DNA于16℃连接12h,感受态冰上化冻后立即加入连接产物,冰上放置20-30min,热激60s,后立即转到冰上静置2min,加1ml LB液体培养基于37℃恒温水浴摇床培养复菌1h（不含amp）,离心弃850-900菌液,后涂版
1 LB固体培养基不加amp,10h后没有菌落
2 LB固体培养基加amp,连接产物的不生长（600bp）,加载体中对照标准片段（700bp）不生长,（注,以上两种都进行16℃连接转化）直接加载体于感受态的的不生长（直接加入后转化）
但42℃我经过温度计测量没有问题,感受态也换了几批,
哎,此实验耽搁我大半学期时间,至今未果,我这个心情呀
这句说错了“1 LB固体培养基不加amp，10h后没有菌落”
实际是：1 LB固体培养基不加amp，10h后形成致密菌落
转化前载体与DNA于16℃连接12h,感受态冰上化冻后立即加入连接产物,冰上放置20-30min,热激60s,后立即转到冰上静置2min,加1ml LB液体培养基于37℃恒温水浴摇床培养复菌1h（不含amp）,离心弃850-900菌液,后涂版
1 LB固体培养基不加amp,10h后没有菌落
2 LB固体培养基加amp,连接产物的不生长（600bp）,加载体中对照标准片段（700bp）不生长,（注,以上两种都进行16℃连接转化）直接加载体于感受态的的不生长（直接加入后转化）
但42℃我经过温度计测量没有问题,感受态也换了几批,
哎,此实验耽搁我大半学期时间,至今未果,我这个心情呀
这句说错了“1 LB固体培养基不加amp，10h后没有菌落”
实际是：1 LB固体培养基不加amp，10h后形成致密菌落
冰上30分钟 热激90S 加1ml培养基37° 180转摇1h
如果是直接加载体的话不要摇1h 直接涂板
如果还不行 那只能是你的连接有问题 或者载体有问题了 可能抗性基因不表达
再问： 我一直考虑载体问题，可换了三次载体了，全是买的，最近定的pmd-18T 载体，我没法怀疑是它的问题了 amp也没有失效呀，因为不加AMP的都长了
再答： 我是说你载体的AMP表达有问题 所以不加AMP的都长了 先按照我说的实验步骤试试咯
如果是直接加载体的话不要摇1h 直接涂板
如果还不行 那只能是你的连接有问题 或者载体有问题了 可能抗性基因不表达
再问： 我一直考虑载体问题，可换了三次载体了，全是买的，最近定的pmd-18T 载体，我没法怀疑是它的问题了 amp也没有失效呀，因为不加AMP的都长了
再答： 我是说你载体的AMP表达有问题 所以不加AMP的都长了 先按照我说的实验步骤试试咯