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什么是等电点聚焦电泳?论述其优点和缺点?

来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/22 14:28:28
什么是等电点聚焦电泳?论述其优点和缺点?
等电聚焦电泳是利用特殊的一种缓冲液(两性电解质)在凝胶(常用聚丙烯酰胺凝胶)内制造一个pH梯度,电泳时每种蛋白质就将迁移到等于其等电点(pI)的pH处(此时此蛋白质不再带有净的正或负电荷),形成一个很窄的区带.
电聚焦的优点是:有很高的分辨率,可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开;一般电泳由于受扩散作用的影响,随着时间和所走的距离加长,区带越走越宽,而电聚焦能抵消扩散作用,使区带越走越窄;由于这种电聚焦作用,不管样品加在什么部位,都可聚焦到其电点,很稀的样品也可进行分离;可直接测出蛋白质的等电点,其精确度可达0.01pH单位.电聚焦技术的缺点是:一是电聚焦要求用无盐溶液,而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀,二 是样品中的成分必需停留于其等电点,不适用在等电点不溶或发生变性的蛋白质.