上游引物和下游引物的温度差4度可以么?

高分~~急求!如果要用PCR扩增下列序列,请写出上游引物和下游引物的序列 PCR扩增基因设计引物时,用Primer5检测上游引物和下游引物的互补性,显示free energy= 1.50 Kca PCR扩增一下序列,请写出上游引物和下游引物. 想用PCR扩增下面一段序列,急求高手写出上游引物和下游引物. 设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度! 想用PCR扩增下面一段序列,急求高手写出上游引物和下游引物.要求上游加EcoRⅠ酶切位点、下游加BamH I酶 请问PCR一定要两条引物吗?如果我只加一条上游引物,是否可以扩出更长的片断?因为没有下游引物的中止作用了. mRNA反转录是特异性引物加上游还是下游的 为什么PCR引物设计中引物可以不从扩增序列两头开始?不从两头开始能得到上下游引物以外的序列吗? 追问引物设计第一次PCR的产物胶回收后用纯化吗,还是可以直接当做底物?目的基因3‘端GC含量太高,导致上下游引物Tm值差 RT-PCR,自己前后引物Tm差7度,前引物63度,后引物58度,退火温度如何设置? microRNA的茎环引物及其PCR扩增的上游引物怎么设计?