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什么原因会导致overlap PCR拼不出?

来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:数学作业 时间:2024/04/29 04:12:52
什么原因会导致overlap PCR拼不出?
两个片段的大小不能太大.
中间重叠部分不能太短,至少要有20nt以上.30,40比较好.
再问: 谢谢!是3个片段拼接,长度分别为900bp,1300bp,300bp,3个片段扩的很亮,引物拼接区重叠碱基20多个应该足够了,就是拼接区GC含量较高70%多,全长GC55%。
再答: 这个估计不行..一方面900和1300片段太大了..20多个重叠对于这么大的片段来说,实在太小了... 另一方面,GC含量高,不容易配对啊.. 你可以尝试多分几段,慢慢连一起,可能会成功..