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骨髓细胞原代培养细胞总是生长得不理想,是微环境模仿的不对还是什么原因呢?

来源:学生作业帮 编辑:拍题作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/19 03:59:29
骨髓细胞原代培养细胞总是生长得不理想,是微环境模仿的不对还是什么原因呢?
我抽提的兔骨髓细胞(欲分离骨髓基质干细胞)原代培养的时候.细胞总是生长得不理想,连分瓶都无法实现,我用的是DMEM培养基,是微环境模仿的不对还是什么原因呢?
博凌科为兔骨髓MSC的分离:取成年新西兰兔用3%戊巴比妥钠按1mg/kg的剂量施以全身麻醉,另用1%利多卡因于手术部位施以局麻;无菌操作下于右胫骨上端内 侧部用锐性穿刺锥于骨皮质上开出一直径约2-3mm的孔,使通达髓腔;用18号硬膜外穿刺针接5ml注射器,内含3000U/ml的肝素0.1ml,沿骨 皮质上的孔穿入髓腔,抽出骨髓血约2ml;抽出的骨髓血用平衡液洗涤两次后,离心180xg,5min;弃去上清液,沉淀用Ham f12-10%FBS培养液重新打匀;用灭菌的0.17mol/L饱和NH4Cl溶液按1∶5的体积比加入已重新打匀的悬液中,4℃下保留10min,取 出再离心180xg,5min;弃去上清后,以几滴平衡液再悬浮后,用细胞计数板作细胞计数,确认有核骨髓细胞量达106-107后,即可进行原代培养接 种用.