为什么基因测序失败?都提纯了基因,跑了电泳有结果,测序上游引物有成功,下游引物却没有?为什么?

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：综合作业时间：2024/05/16 13:28:24

1、你测的是片段?引物是自己设计的吗?下游测不出来有可能是引物不佳.之前是否用此引物测过?
2、你的片段多长?必须双向测通吗?如果必须双向的话,不妨连接载体,比如T载体什么的,然后提质粒出来,用载体上的通用引物测,会好一些.
3、实在无法解决,可以让测序公司根据上游的测序结果自行设计引物,多测几个反应,直到测通.这样费用要高一些.
再问：是双向测通，以前没用过，如果下游引物不佳，为什么还能扩增，跑出电泳呢？如果是测序公司的原因也有可能吧？你的建议蛮好的，连接T载体。
再答：看来你是用PCR引物直接做测序引物了。虽然很多情况下的确可以通用，但是不排除有时候不能的情况...测序引物要求纯度高，而且退火温度比PCR严格些。还是用通用引物测最省事，涂板摇菌也不耽误多少时间...
再问：通用引物和自己设计的那引物测序有什么不同么？为什么不都用通用引物呢？
再答：通用引物都是经过很多次验证的，肯定能够测出来的。而PCR引物根据基因的不同，每个都不一样，仅验证了PCR能够成功，但测序并未验证过，所以成功率肯定比不上通用引物。测序引物对Tm、GC%、长度、同源性、二级结构、纯度等指标上都比PCR引物严格，比如你的引物Tm在65度，55度退火一样能P出条带，但是测序就不行了。所以有时会出现能P出来但测不出的情况。 “为什么不都用通用引物呢”，呃，反正我们实验室测序90%都是用通用引物，自己设计引物的时候极少...能用的时候肯定用的...

PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我【求助】测序结果找不到上下游引物,怎么回事啊? 目的基因上游引物中引入了终止密码,而原核表达载体上有ATG,这样我的目的基因能被表达出来吗? 有哪些基因测序公司,以及合成引物的公司? PCR扩增基因设计引物时,用Primer5检测上游引物和下游引物的互补性,显示free energy= 1.50 Kca 为什么在基因克隆中,除开设计PCR引物还要设计表达基因引物? PCR之后电泳没有条带,连引物二聚体都没有?这是怎么回事了? 我找到了引物,想跑PCR,却不知道目的基因大小,怎么办为什么pcr 引物设计出来,下游引物加上酶切位点和保护碱基后,有一个Tm值是负值呀? 自己设计了一对引物克隆一段基因,PCR出不来结果可能是什么问题? 请问PCR一定要两条引物吗?如果我只加一条上游引物,是否可以扩出更长的片断?因为没有下游引物的中止作用了. 高中生物简单问题PCR技术中引物用了31个,DNA是双链为什么引物有奇数个