作业帮Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/29 13:56:54
Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了
你可以是试试,Takara的LA试剂盒!这个我们实验室就是用的这么,TAIL-pcr 不太好用!我觉得!
虽然TALL-PCR有着上述众多的优点,但是它仍然存在着不尽人意的地方： TAIL-PCR反应需要较多的引物组合.此外,由于AP引物存在有限的结合位点,对于个别的侧翼序列,即使使用不同的简并引物也难以扩增到阳性结果.整个TAIL-PCR需要一系列连续的反应,反应条件的设置要求比较精细[51].
1.5.3 利用接头的染色体步移技术
此技术是一个用来扩增基因组中已知序列两侧未知序列的方法.其原理如下：首先,用几种限制性内切酶酶切基因组DNA,然后将酶切后的DNA与体外合成的接头在适当的条件下连接,取适量连接产物直接作为PCR模板进行PCR反应,其中一条引物为接头特异引物,其序列能与接头序列互补,另一条引物为基因特异引物,其序列与已知序列互补.最后将得到的PCR产物测序[53].
根据这个原理,TaKaRa公司推出了LA PCRTM in vitro Cloning试剂盒(DDR015)来克隆基因侧翼未知序列,其流程如图1-4.因为在设计上,Cassette的5′末端没有磷酸基,所以Target DNA的3′末端和Cassette的5′末端的连接部位形成缺口.在第一次PCR反应的第一个循环时,从Primer C1开始的延伸反应在连接部位终止,限制了Primer C1和Primer C1同一引物之间的扩增,从而控制了非特异性PCR扩增.只有从Primer S1开始延伸合成的DNA链,才能成为Primer C1的模板,进行DNA的特异性扩增反应.再用内侧Primer (Primer C2,Primer S2) 进行第二次PCR反应,可以高效特异性地扩增目的DNA[54].
虽然TALL-PCR有着上述众多的优点,但是它仍然存在着不尽人意的地方： TAIL-PCR反应需要较多的引物组合.此外,由于AP引物存在有限的结合位点,对于个别的侧翼序列,即使使用不同的简并引物也难以扩增到阳性结果.整个TAIL-PCR需要一系列连续的反应,反应条件的设置要求比较精细[51].
1.5.3 利用接头的染色体步移技术
此技术是一个用来扩增基因组中已知序列两侧未知序列的方法.其原理如下：首先,用几种限制性内切酶酶切基因组DNA,然后将酶切后的DNA与体外合成的接头在适当的条件下连接,取适量连接产物直接作为PCR模板进行PCR反应,其中一条引物为接头特异引物,其序列能与接头序列互补,另一条引物为基因特异引物,其序列与已知序列互补.最后将得到的PCR产物测序[53].
根据这个原理,TaKaRa公司推出了LA PCRTM in vitro Cloning试剂盒(DDR015)来克隆基因侧翼未知序列,其流程如图1-4.因为在设计上,Cassette的5′末端没有磷酸基,所以Target DNA的3′末端和Cassette的5′末端的连接部位形成缺口.在第一次PCR反应的第一个循环时,从Primer C1开始的延伸反应在连接部位终止,限制了Primer C1和Primer C1同一引物之间的扩增,从而控制了非特异性PCR扩增.只有从Primer S1开始延伸合成的DNA链,才能成为Primer C1的模板,进行DNA的特异性扩增反应.再用内侧Primer (Primer C2,Primer S2) 进行第二次PCR反应,可以高效特异性地扩增目的DNA[54].
用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列
RT-PCR根据什么序列设计引物
侧翼序列包括什么
什么是侧翼序列
试根据一段序列设计一对pcr引物,并在两端加上两个限制性酶切位点
不知序列的DNA模板PCR引物的设计
正向引物与反向引物在PCR中是什么作用?是不是一定都要?比如有这样一段序列,要扩增基因1,用什么正向和反向引物序列?
PCR扩增一下序列,请写出上游引物和下游引物.
做RT-PCR设计引物时,找引物序列有哪些好方法?
想用PCR扩增下面一段序列,急求高手写出上游引物和下游引物.
怎样通过已知基因序列和引物序列 测算PCR产物大小
高分~~急求!如果要用PCR扩增下列序列,请写出上游引物和下游引物的序列