作业帮DNA的分离和纯化的问题!
来源：学生作业帮 编辑：拍题作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/30 15:32:15
DNA的分离和纯化的问题!
首先向问一下：在纯化过程中氯仿-异戊醇是如何去除蛋白质的，然后是在DNA沉淀的时候为什么要加冷的乙醇，接下来是关于SDS市怎样让dna与蛋白质分离的，还有就是RNase是蛋白质酶，还是RNA酶，以及在使用紫外分光光度时A260/A280=1.8即表明RNA已被除净，蛋白质的含量不超过0.3%是为什么！
首先向问一下：在纯化过程中氯仿-异戊醇是如何去除蛋白质的，然后是在DNA沉淀的时候为什么要加冷的乙醇，接下来是关于SDS市怎样让dna与蛋白质分离的，还有就是RNase是蛋白质酶，还是RNA酶，以及在使用紫外分光光度时A260/A280=1.8即表明RNA已被除净，蛋白质的含量不超过0.3%是为什么！
氯仿除去蛋白：氯仿是非极性分子,水是极性分子,当蛋白水溶液与氯仿混合时,蛋白质分子之间的水分子就被氯仿挤去,使蛋白失去水合状态而变性.经过离心,变性蛋白质的密度比水的密度为大,因而与水相分离,沉淀在水相下面,从而与溶解在水相中的DNA分开.而酚与氯仿有机溶剂比重更大,保留在最下层.加入异戊醇能降低分子表面张力,能减少抽提过程中的泡沫产生.同时异戊醇有助于分相,使离心后的上层水相,中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定.
加预冷的乙醇：冷的乙醇沉淀能力更强.乙醇沉淀DNA的机理是,DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合.
SDS：SDS只是阳离子表活性剂,是蛋白质,特别是膜蛋白的变性剂.在基因组DNA提取中,SDS只是起破碎细胞游离核酸的作用,无法使DNA与蛋白质分离的.只有在碱裂解法提取质粒DNA,通过高盐（醋酸钾或醋酸钠）及低pH（4.5左右）中和下,SDS会沉淀,SDS沉淀过程中使得变性的DNA共沉淀,而经过中和复性的质粒DNA则不会沉淀,再通过离心即可把质粒DNA与基因组DNA及蛋白质分离.
RNase是RNA酶,能特定消化RNA,而不是蛋白质.
核酸分子（DNA或RNA）由于含有嘌吟环和嘧啶环的共轭双键,在260 nm波长处有特异的紫外吸收峰,其吸收强度与核酸的浓度成正比,这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础.蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质.吸收高峰在280nm 处,其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比.紫外分光光度法不但能确定核酸的浓度,还可通过测定260nm和280nm的紫外线吸收值的比值（A260/A280）估计核酸的纯度,纯的DNA制品的比值为1.8,RNA的比值为2.0, 若DNA高于1.8,则可能有RNA污染,低于1.8则有蛋白质污染.
现在试剂盒是很普及的,使用试剂盒基本上不再需要酚,氯仿等有机溶剂.国内很多厂家都有产,本人使用过广州捷倍斯生物产的感觉就很不错.
加预冷的乙醇：冷的乙醇沉淀能力更强.乙醇沉淀DNA的机理是,DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合.
SDS：SDS只是阳离子表活性剂,是蛋白质,特别是膜蛋白的变性剂.在基因组DNA提取中,SDS只是起破碎细胞游离核酸的作用,无法使DNA与蛋白质分离的.只有在碱裂解法提取质粒DNA,通过高盐（醋酸钾或醋酸钠）及低pH（4.5左右）中和下,SDS会沉淀,SDS沉淀过程中使得变性的DNA共沉淀,而经过中和复性的质粒DNA则不会沉淀,再通过离心即可把质粒DNA与基因组DNA及蛋白质分离.
RNase是RNA酶,能特定消化RNA,而不是蛋白质.
核酸分子（DNA或RNA）由于含有嘌吟环和嘧啶环的共轭双键,在260 nm波长处有特异的紫外吸收峰,其吸收强度与核酸的浓度成正比,这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础.蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质.吸收高峰在280nm 处,其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比.紫外分光光度法不但能确定核酸的浓度,还可通过测定260nm和280nm的紫外线吸收值的比值（A260/A280）估计核酸的纯度,纯的DNA制品的比值为1.8,RNA的比值为2.0, 若DNA高于1.8,则可能有RNA污染,低于1.8则有蛋白质污染.
现在试剂盒是很普及的,使用试剂盒基本上不再需要酚,氯仿等有机溶剂.国内很多厂家都有产,本人使用过广州捷倍斯生物产的感觉就很不错.