关于植物原生质体提取,请做过这方面实验的高手指教~

来源：学生作业帮编辑：拍题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/04/29 08:40:58

关于植物原生质体提取,请做过这方面实验的高手指教~
我用培养7天的黄瓜子叶提取原生质体,但实验多次都不成功.酶液成分：1%纤维素酶,1%果胶酶,0.7M甘露醇,0.7mM磷酸二氢钾,10mM二水合氯化钙,PH6.取3~4片子叶,剪碎后,加1ml酶液,25度,50rpm,酶解4h（甚至更长时间）.叶子基本没有什么变化,酶液也很澄清；取少量在显微镜下观察也看不到细胞形态的东西.
自己分析有一下几个问题：
（1）我用的是黄化苗,
（2）我就像配一般试剂一样,按剂量称取,然后溶解定容的.酶液配置过程中有没有什么特别要求?甘露醇浓度是不是太高?
（3）子叶需要撕去下表皮吗?是不是不能用剪的,而要用解剖刀切,还要按一定方向?
（4）显微镜下看不到细胞会不会是因为黄化苗中没有叶绿体不好辨认?
也或者是其他什么原因,请大家帮我分析分析,给些建议~感激不尽!

1 黄化苗对有的植物来说只会更有利做原生质体,比如玉米.
2 酶液均要过0.45的膜, 过滤灭菌.
3 老的方法要撕下表皮,现在常用手术刀片切,要极细的长条.
4 不会,黄化苗的原生质体在显微镜下会成浅浅的黄色,还是能分辨出来的.
你所描述的情况有可能的原因：1 酶失活.2 叶子切得不够细,起码要1mm.3 我觉得你调的渗透压有点高,一般植物0.5-0.6
给你个网址哈佛大学 Professor shen 的lab, 做原生质体最牛的人,上面有视屏和Protocol, 希望对你有用.（一般做原生质体都是先从拟南芥开始,先练练手,在此基础上建立感兴趣植物的protocol）
http://genetics.mgh.harvard.edu/sheenweb/protocols_reg.html

关于植物的原生质体融合植物原生质体融合的基本原理是什么? 植物原生质体融合什么叫植物原生质体如何进行植物原生质体的融合植物原生质体融合后在生细胞壁的过成程中哪些细胞器活动明显增强植物细胞工程技术就是在原生质体培养的基础上的原生质体融合技术. "植物体细胞杂交中原生质体融合"需要细胞膜的流动性吗?原生质体是什么东西? 植物细胞壁以内称为原生质体,那细胞壁不属于原生质体为什么是错的. 将两种不同植物的原生质体融合叫做植物体细胞杂交.——这句话对吗? 植物细胞用酶解法除去细胞壁后,其原生质体依靠细胞膜的流动性进行融合.这句话怎么理解呢原生质体为什么要进行融合? 为什么植物原生质体的融合依赖细胞膜流动性植物石蜡切片及其免疫组化,请做过这方面实验的学长学姐们帮帮忙!